FISH技术在血液肿瘤中的应用

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1、上海市第一人民医院ShanghaiFirstPeople’sHospital上海市第一人民医院ShanghaiFirstPeople’sHospital上海市第一人民医院血液科ShanghaiFirstPeople’sHospital荧光原位杂交（FISH）在血液肿瘤中的应用FISH的定义荧光原位杂交（FISH）是20世纪八十年代在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的新技术。它利用已知核酸序列作为探针，以荧光素直接标记或先以生物素或地高辛等半抗原标记后与靶DNA进行杂交，再通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物，最后在荧光显微镜下

2、观察杂交信号，从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析。FISH技术原理FISH技术原理FISH技术原理FISH技术原理FISH技术原理FISH技术原理FISH技术原理FISH的种类间期FISH（InterphaseFISH）染色体涂染分析（Chromosomepainting）多色FISH（Multicolor-FISH）反向涂染（Reversepainting）比较基因组杂交（Comparativegenomichybridization）FISH探针的种类和用途着丝粒探针用于检测染色体数目异常如三体、单体等。亚端粒探针靠近端粒的200-3

3、00Kb为染色体特异性DNA，用于检测涉及端粒的隐匿性易位。染色体臂或整条染色体涂染探针（WCP）用于检测染色体易位和标记染色体。序列特异性探针包括臂、带和基因探针等多种，用于检测基因缺失和重排。血液肿瘤FISH检测常见探针类型双色双融合探针（DC，DF）额外信号探针（ES）分离探针（BRK）FISH在血液肿瘤中的应用检测样本可以是血液、骨髓、石蜡切片诊断和鉴别诊断治疗和预后分层监测疗效（微小残留病灶检测）识别移植后骨髓细胞来源一、诊断和鉴别诊断核型分析缺点：有丝分裂象少或缺如染色体质量低劣，显带不佳染色体异常复杂分子生物学检测不足：常见的转录序列

4、来设计引物，扩增的片段长度一般在100～700bp之间mRNA剪切方式比较特殊，假阴性结果，易造成漏诊或误诊一、诊断和鉴别诊断FISH技术能弥补以上2种技术的不足之处间期细胞上分析（无需中期分裂象），极大地提高了敏感性、准确性和可靠性。对核型提示的染色体异常做进一步鉴定，从“正常核型”中筛查隐匿的染色体畸变，成为精确的染色体分析不可缺少的手段。FISH探针的片段相对较长，常可达数百kb，甚至大于1Mb，跨越融合基因每一侧多个外显子区域，只要发生在这些区域的缺失或易位都能被检测到，极少发生漏检，假阴性率很低。举例男性46岁患者，2003.2.24内科

5、急诊发现白细胞增高（25×109/L）。骨髓显示粒系极度增生，红系、巨核系以及血小板增生尚可，NAP积分49分，核型分析结果为46,XY[20]。随访3年，其白细胞始终维持在20-30×109水平。一、诊断2006.5.4发现白细胞增高至170×109，血小板511×109，血红蛋白118g/dL。骨髓象显示早幼粒细胞占6%，中幼粒细胞占13%，核型分析未见分裂象。BCR-ABL210基因阴性，经单融合FISH探针证实骨髓59%细胞BCR-ABL融合基因阳性。接受格列卫治疗，2006.9.7复查，FISH阳性细胞比例降低至7.4%，2006.10.

6、23以后的复查结果FISH都为阴性。一、诊断其他常用于诊断的探针还有：PML/RARA，AML1/ETO，CBFβ，TEL/AML1等。以CBFβ探针为例：发生16号染色体倒位的细胞其荧光信号由2F变成1F/1R/1G。有研究表明CBFβ探针对inv(16)导致的CBFβ-MYH11融合基因的检出率与分子生物学的方法相当。一、诊断一、诊断—急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病检测探针探针定位异常染色体GLP4/GLP10GLP4:4p11.1-q11.1GLP10:10p11.1-q11.1+4，+10GLP17GLP17:17q11+17GLPT

7、EL/GLPAML1GLPAML1：21q22GLPTEL：12p13t(12;21)GLPMLLGLPMLL：11q23t(11;v)GLPBCR/GLPABL(DF)GLPBCR:22q11.2GLPABL:9q34t(9;22)一、诊断—淋巴瘤B细胞淋巴瘤—IGH基因断裂重组滤泡性淋巴瘤—IGH/BCL2融合基因套细胞淋巴瘤—IGH/CCND1融合基因弥漫大B细胞淋巴瘤—BCL6基因Burkitt淋巴瘤—C-MYC基因粘膜相关淋巴组织淋巴瘤—MALT基因断裂重组鉴别诊断，以BCR/ABL探针为例：额外信号的BCR/ABL探针（ES）根据荧光信

8、号的模式不同，可以鉴别MBCR断裂点（P210）和mBCR断裂点(P190)。MBCR断裂点的细胞呈现1Y/2R/1G的信