《荧光红外酶标仪》PPT课件

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1、§16.1光学仪器简介§16.2酶标仪的原理应用及操作§16.3荧光光谱仪原理应用及操作§16.4红外光谱仪原理应用及操作§16酶标仪、荧光光谱仪、红外光谱仪的使用§16.1光学仪器简介一、光学知识回顾1．可见光的颜色和互补色：在可见光范围内，不同波长的光的颜色是不同的。平常所见的白光（日光、白炽灯光等）是一种复合光，它是由各种颜色的光按一定比例混合而得的。利用棱镜等分光器可将它分解成红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等不同颜色的单色光。白光除了可由所有波长的可见光复合得到外，还可由适当的两种颜色的光按一定比例复合得到。能复合成白光的两种颜色

2、的光叫互补色光。/nm颜色互补光400-450紫黄绿450-480蓝黄480-490绿蓝橙490-500蓝绿红500-560绿红紫560-580黄绿紫580-610黄蓝610-650橙绿蓝650-760红蓝绿完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光2．物质的颜色与吸收光的关系：当白光照射到物质上时，如果物质对白光中某种颜色的光产生了选择性的吸收，则物质就会显示出一定的颜色。物质所显示的颜色是吸收光的互补色。物质颜色吸收光物质颜色吸收光颜色波长范围（nm）颜色波长范围(nm)黄绿紫400～450紫绿560～580黄蓝450

3、～480蓝黄580～600橙绿蓝480～490绿蓝橙600～650红蓝绿490～500蓝绿红650～760紫红绿500～560三原色RGB红绿蓝印刷的三原色是RGB的互补色yellow黄，cyan青，magenta品红（或者叫洋红、红紫光分析法：基于电磁辐射能量与待测物质相互作用后所产生的辐射信号与物质组成及结构关系所建立起来的分析方法；电磁辐射范围：射线～无线电波所有范围；相互作用方式：发射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等；光分析法在研究物质组成、结构表征、表面分析等方面具有其他方法不可取代的地位；二、光分析法及其特点三个基本

4、过程：（1）能源提供能量；（2）能量与被测物之间的相互作用；（3）产生信号。基本特点：（1）所有光分析法均包含三个基本过程；（2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）；（3）涉及大量光学元器件。三、电磁辐射的基本性质1.电磁辐射的波动性散射折射与反射衍射干涉偏振波长—cm、µm、nm、A频率—υHzsec-1波数—σcm-1传播速度—cm/sec2.电磁辐射的粒子性3.普朗克(Planch)公式光电效应康普敦效应黑体辐射一).电磁辐射的波粒二象性E--光子的能量J,焦耳υ---光子的频率Hz,赫兹---光子的波长cmC

5、---光速2.99791010cm.s-1h---Planch常数6.625610-34J.s焦耳.秒E=hν=hc/λc=λν=ν/σ吸收发射C=299,792,458米/秒波谱区-射线波长5~140pm跃迁类型核能级X-射线远紫外光10-3~10nm10~200nm原子内层电子莫斯鲍尔光谱法:-射线原子核-射线吸收X-射线吸收光谱法:X-射线/放射源原子内层电子（n>10)X-射线吸收X-荧光光谱法:X-射线原子内层电子特征X-射线发射远紫外光----真空紫外区。此部分光谱会被空气吸收近紫外光可见光200~4

6、00nm400~750nm原子外层电子/分子成键电子原子光谱：原子发射光谱、原子吸收光谱、原子荧光光谱分子光谱：紫外-可见吸收光谱、分子荧光/磷光光谱、化学发光二)光学分析法波谱波谱区近红外光中红外光波长0.75~2.5m2.5~50m跃迁类型分子振动远红外光微波射频50~1990m0.1~100cm1~100m分子转动电子、核自旋近红外光谱区:配位化学的研究对象红外吸收光谱法:红外光分子吸收远红外光谱区电子自旋共振波谱法:微波分子未成对电子吸收核磁共振波谱法:射频原子核自旋吸收三)、本章仪器所用的光波波谱区近紫外光

7、可见光近红外光中红外光远红外光波长200~400nm400~750nm0.75~2.5m2.5~50m50~1990m跃迁类型原子外层电子分子成键电子分子振动分子转动酶标仪、荧光分光光度计红外分光光度计-射线5~140pmX-射线10-3~10nm远紫外光10~200nm微波0.1~100cm，射频1~100m（核磁共振）2.电磁辐射的吸收与发射A.原子光谱线光谱Linespectrahi半宽度10-2~10-5原子吸收光谱原子发射光谱E2E0E1E3波长λ=hc/△E=hc/(E1-E0)=hν1.物质的能态原子、离子分子

8、△E=E1-E0=hc/λB.分子光谱带光谱Bandspectra有机、无机分子半宽度20~100nm分子吸收光谱分子发射光谱hi波长/nmA(T)波长/nmI半宽度20~100nmE2E1E0△E=△E电子+△E振动