Shimadzu液相色谱基础

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1、液相色谱基础色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。2岛津高效液相色谱仪LC-10Avp系列3高效液相色谱分析过程高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成。分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测

2、器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。4色谱分离过程Temporalcourse流动相5高效液相色谱原理色谱法：利用样品组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：携带样品流过整个系统的液体固定相：静止不动的一相，化学键合型固定相6高效液相色谱法的特点高效液相色谱法法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(HighPressu

3、reLiquidChromatography，HPLC)。HPLC有以下特点：高压-压力可达15~30MPa。高速-流速为0.001~10.000ml/min。高效。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。荧光和电化学检测器可达0.1pg。7高效液相色谱法的分类按分离机制不同分为液固色谱法键合相液相色谱法正相色谱法反相色谱法离子交换色谱法离子对色谱法体积排阻色谱法8液相维护流程图吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器检测器色谱柱9流动相流动相选择注意事项：纯度：采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶

4、剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配10溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。脱气目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）柱流量不准2）检测器基线波动脱气注意点：1）每天脱气(无在线脱气器时）2）混合溶剂脱气时间不能过长11工作原理在线脱气机12何时需要使用在线脱气机13输液泵送液方式：恒流控制恒压控制VP系列：LC-10ADvp泵和LC-10ATvp泵Prominence：LC-20AD、LC-20AT、LC-20AB泵D泵：并联微体积往复式

5、泵T泵：串联式往复泵B泵：并联微体积往复式泵（2组）14等度洗脱和梯度洗脱等度洗脱梯度洗脱15梯度洗脱梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。优点：可提高分离度、缩短分析时间、降低最小检测量和提高分离精度注意事项：溶剂的纯度要高，否则梯度洗脱的重现性差16高压梯度泵系统17四元低压梯度泵系统18进样器自动进样器SIL-10HTSIL-10ASIL-20A/C手动进样器Rheodyne7725/7725i原理：（六通阀）

6、注入方式：1）全量注入2）部分注入19手动进样器使用须知全量进样：进样体积至少为定量环的3倍以上。半量进样：进样量应不大于定量环体积的50%。一定要使用合规格的进样器，规格为外径0.028英寸，长2英寸的平头针。一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈。20装填状态样品注入六通阀21柱温箱柱温控制的优点：分析结果重现性好提高柱效降低柱压保证检测稳定性22低价格，小体积可安装手动进样器温度范围室温-15ºC∽80ºC室温传感器保证分析在可靠的温度范围内进行可单独进行操作容量大，可容纳2个切换阀，手动进样器混合室，VP副控制器CDD/L-ECD检测池温度范围室温

7、+10ºC∽80ºC（Avp)室温-10ºC∽80ºC（ACvp)室温传感器保证分析在可靠的温度范围内进行可单独进行操作CTO-10ASvp(半导体模块加热式）CTO-10A(C)vp(空气循环式）CTO-10A系列23色谱柱反相色谱柱：C18、C8、氰基、氨基、苯基正相色谱柱：硅胶、氰基、氨基离子交换色谱柱：SCX、SAX凝胶色谱柱：凝胶手性色谱柱：牛血清蛋白、AGP、环糊精等24检测器SPD-10Avp(190—600nm)紫外检测器SPD-10AVvp(190-900nm)紫外检测器SPD-M10Avp(190—800nm)二极管阵列检测器RF-10

8、AXL荧光检测器RID-10A示差折光检测器CDD-10Avp电导