快速法用于HIV抗体检测的探讨

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1、快速法用于HIV抗体检测的探讨作者：张宏宾周品众王亚平【摘要】目的在HIV抗体检测中比较快速法与酶标法的敏感性，观察快速法能否用于HIV抗体的初筛。方法用酶联免疫法（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）和胶体硒法（ICA）对同一阳性标本的不同稀释度作检测，比较这三种方法的敏感性。结果三种方法的敏感性不同，ELISA敏感性最高，PA次之。结论快速法不适于HIV抗体的初筛，即使要使用，应以ELISA的结果作为最终报告。【关键词】快速法ELISAHIV相关规范明确提出可以用快速检测方法对应急、门诊急诊的HIV抗体作检测，主要有明胶颗粒凝集试验（PA），免疫渗滤试验，免疫层析试验等[1]。但规范中

2、未明确经快速法检测的阴性结果能否直接发出阴性报告，甚至有某些检测机构用快速法检测的阴性结果直接发出了阴性报告，笔者认为存在较大的漏检可能。据此，笔者选取日常工作中检测出的一份阳性标本，用酶联免疫法（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）和胶体硒法（ICA）对该标本的不同稀释度作检测，比较这三种方法的敏感性，报告如下。1材料与方法51.1标本来源：本实验室日常工作中用ELISA检出的HIV抗体呈阳性反应的血清，经上级单位用免疫印迹试验（WB）确认为阳性；收集经检测为HIV抗体阴性的血清，混合，灭活，经二种以上ELISA试剂确认为阴性。1.2试剂：ELISA试剂采用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的

3、人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法），批号2011051112；PA试剂采用艾康生物技术（杭州）有限公司生产的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（乳胶层析法），批号200909129；ICA试剂采用AbbottJapanCo.,Ltd.生产的人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体诊断试剂盒（胶体硒法），批号10303K100。所有试剂均在有效期内使用。1.3主要仪器设备：Anthos2010酶标仪，Finnpipette（20-200μL）加样器，均在检定/校准有效期内使用。1.4方法：将阳性血清用灭活的阴性血清稀释成1:1×103、1:5×103、1:1×104、1:5×104、1:1

4、×105、1:5×105、1:1×106等不同稀释度，分别用ELISA、PA和ICA按各自说明书所示检测，为保证样本量的一致，加样量均为50μL。1.5结果判断：快速法的结果由2-3人同时判读，以最大稀释度计，不管阳性的强弱均作阳性论；酶标法以样本的OD值与Cutoff值之比（S/C.O）计。2结果三种方法的检测结果见表1。对于笔者所选的阳性标本因暂时无法准确定量到NCU/mL，故仅用稀释度表示，ICA的敏感度在1:5×103～1:1×104，PA的敏感度在1:5×104～1:1×105，ELISA在10-6稀释度S/C.O仍大于1（阳性反应）。表1三种方法对同一样本不同稀释度的检测结果5+

5、表示阳性反应，-表示阴性反应。3讨论3.1由表1可知，三种方法的敏感性不相同，与其他二种快速法相比，ELISA敏感性最高，这与文献[2、3]是完全一致的。笔者在工作中发现某些检测机构用一种快速方法对HIV抗体初筛，阳性者用ELISA复检，阴性者直接发出报告，存在较大漏检的可能。以笔者的实验来说，快速法的敏感性约比ELISA方法低2-3个数量级，尤其对于弱阳性标本，如HIV感染早期，假阴性的可能性更大。对于HIV检测来说，假阴性比假阳性对社会的危害要严重得多，因为HIV阳性标本要经过初筛、相同试剂和不同试剂复检、确证等多种方法多次检测才能确定阳性结果，而阴性标本通常只有一次检测就发出报告，没有

6、足够关注。如今，在一些偏远的地区都具有酶标仪等基础仪器设备，故笔者建议尽量用ELISA作为HIV抗体检测的基本方法。即使因种种原因，如仪器设备临时故障、应急、急诊手术等样本需要快速检测的，阴性结果仅初报，标本妥善保存，待用ELISA检测最终确认为阴性时发出正式报告，以减少假阴性的可能。有文献[4]提出，HIV抗体筛查检测中，以ELISA法为主，对阳性的样本再以快速法检测。这样既可提高阳性率，防止漏检，又节省了反复实验的时间，不失为较妥当的方法。53.2有文献报道ELISA方法的影响因素较多[5]，如加样方式、温育温度、洗涤方法、显色时间及温度等，从对基层HIV实验室的督导中发现，这些影响因素

7、确实存在，如果严格按照试剂盒说明书和相关文献[6、7]操作，这些影响因素均可以避免。快速法具有操作简单，不需要仪器设备，结果直观、快速、省时，甚至可以检测全血等优点[8]，但其存在加样量未标准化、结果的判读带有相当的主观性等缺点，更为重要的是快速法的敏感性是无法与酶标方法比拟的。笔者建议有条件的单位尽量使用ELISA方法，以减少检测风险。3.3快速法中各方法的敏感性亦不一样，笔者选用的PA法比ICA法约高1个