强力霉素对移植肺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的研究

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1、强力霉素对移植肺缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的研究【摘要】目的探讨外源性基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)抑制剂强力霉素在移植肺缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的影响。方法建立大鼠自体左肺肺缺血再灌注模型，16只SD受体大鼠随机分为两组:缺血再灌注组和强力霉素组，用免疫组化方法观察移植肺Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况，并取肺组织平滑肌细胞进行培养，采用荧光技术测定肺组织细胞凋亡。结果肺缺血再灌注后，与对照组相比，强力霉素组移植肺Bax和Caspase-3表达明显降低(P<0.01)，Bcl-2的表达无明显变化(P

2、>0.05)，但Bcl-2/Bax比例升高；荧光图片显示，强力霉素组的细胞凋亡明显较对照组减少。结论强力霉素可能通过下调Bax、Caspase-3表达，提高Bcl-2/Bax比例而抑制肺缺血再灌注损伤的细胞凋亡，并通过降低基底膜的降解，减轻肺水肿，达到肺保护作用。【关键词】肺；缺血-再灌注损伤；强力霉素【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofexogenousmatrixmetalloproteinaseinhibitoronpneumocyteapoptosisinlungischemia-reperfusioni

3、njuryandthemechanism.MethodsModelsofischemia-reperfusionlunginjuryinSDrats10wererandomlydividedintotwogroups.TheproteinlevelexpressionofBcl-2、BaxandCaspase-3wasmeasuredbyimmunohistochemistrymethodsafter2htransplantation.ApoptoticmorphologicalchangeswereassayedwithHoechst33258stainingand

4、wereobservedunderfluorescentmicroscope.ResultsTheproteinlevelexpressionofBaxandCaspase-3wassignificantlydecreasedindoxycyclinegroupthanincontrolgroup(P<0.01)，theexpressionofBcl-2wasnotsignificantlyincreasedindoxycyclinegroup，buttheratioofBcl-2/Baxwassignificantlyincreasedindoxycyclin

5、egroup(P<0.01).AftertreatmentwithMMPsinhibitor，PMVECsapoptosisdecreasedsignificant.ConclusionsDoxycyclinecansuppressapoptosisandprotectlungtissuecellinthelungischemia-reperfusioninjury.肺移植作为治疗多种终末期肺疾病的有效方法，于1983年在临床上首次获得成功。但越来越多的证据显示，供肺/移植肺仍然易于受到保存损伤(缺血)和再灌注损伤，导致移植后早期严重移植肺功能不全的发生率高达2

6、0%，移植受者术后ICU监护时间延长，术后早期死亡率增加［1］，并与移植后晚期较高的闭塞性支气管炎（obliterative10bronchitis，OB）发生率相关。因此，研究低温肺保存后再灌注损伤的机制，改善移植肺功能，仍然是肺移植领域中所急需解决的重点课题之一。众多研究表明，心肌细胞凋亡是肺缺血再灌注损伤的重要表现形式。细胞凋亡受多种因素的调控，尤其是凋亡调控基因Bcl-2、Bax和凋亡执行基因Caspase-3［2，3］。本研究旨在通过建立大鼠自体左肺肺缺血再灌注模型移植模型，探讨外源性基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs

7、)抑制剂强力霉素在移植肺缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的影响。1材料与方法1.1实验分组、模型建立和取样1.1.1实验分组健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠16只(武汉大学医学院实验动物中心提供），体重250～340g，随机分为两组：A组（n=8）：缺血（IR）组，大鼠左肺经历原位热缺血30min、冷缺血3h、热缺血30min和不同时间的再灌注处理；B组（n=8）：治疗组，术前一次性灌胃，连续7天，缺血90min，再灌2h于左肺门开放前10min经颈静脉注入强力霉素30mg/(kg·d)，其余操作同IR组。A组和B组给予等体积的生理盐水。1.1