DNA分子标记的种类

DNA分子标记的种类

ID:36491038

大小:715.10 KB

页数:48页

时间:2019-05-09

DNA分子标记的种类_第1页
DNA分子标记的种类_第2页
DNA分子标记的种类_第3页
DNA分子标记的种类_第4页
DNA分子标记的种类_第5页
资源描述:

《DNA分子标记的种类》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库

1、DNA分子标记的种类以及进展分子标记的定义广义的分子标记(molecularmarker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义的分子标记概念只是指DNA标记,而这个界定现在被广泛采纳。理想分子标记的界定(1)具有高的多态性(2)共显性遗传,即利用分子标记可鉴别二倍体中杂台和纯台基因型(3)能明确辨别等位基因;(4)遍布整个基因组;(5)除特殊位点的标记外,要求分子标记均匀分布于整个基因组;(6)选择中性(即无基因多效性);(7)检测手段简单、快速(如实验程序易自动化);(8)开发成本和使用成本尽

2、量低廉;(9)在实验室内和实验空间重复性好(便于数据交换)。但是,目前发现的任何一种分子标记均不能满足以上所有要求DNA分子标记分类一、第一代分子标记技术以southern杂交为核心的分子标记技术:RELP标记等二、第二代分子标记技术基于PCR的DNA分子标记:RAPD标记、ISSR标记、SSR标记、STS标记等基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记:AFLP标记、CAPS标记等三、第三代分子标记技术基于单核苷酸多态性的DNA分子标记:SNP标记四、其他几种新型分子标记一、第一代分子标记技术限制性片段

3、长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,缩写RFLP)是发展最早的分子标记技术。RFLP技术的原理是检测DNA在限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位点变异的突变如点突变(新产生和去除酶切位点)和一段DNA的重新组织(如插人和缺失造成酶切位点问的长度发生变化)等均可导致RFLP的产生。流程图酶切→→电泳→→标记探针杂交→→分析一般选择单拷贝探针如果RFLP探针是来自拷贝数可变串联重复(Variblenumberoftandemr

4、epeats,缩VNTR).则产生另一类因相同或相近序列的拷贝数变化所起的多态性。凡是引起复单位的大小和序列不同、基因组中重复的数目和分布不同等均可导致这种多态性的产生。在RFLP技术中成为分子标记的重复序列包括:(1)小卫星(minisatellite)序列:重复单位(motif)约有碱基l0~60个(也有16~100个碱基一说),在基因组中多次出现。(2)微卫星(microsatelite)或简单重复序列(simplesepuencerepeats,缩写SSR):重复单位含有1~5碱基(也有2~8个碱

5、基一说)二、第二代分子标记技术1、基于PCR的DNA分子标记①随机引物PCR标记:RAPD标记、ISSR标、AP-PCR、DAF等②特异引物PCR标记:SSR标记、STS标记、SCAR、SPAR、SSCAP、ddF等2、基于PCR与限制性酶切技术结合的DNA标记①限制性酶切片段的选择性扩增来显示片段的多态性:AFLP标记等②对PCR扩增片段的限制性酶切来揭示扩增区段的多态性:CAPS标记等1.1.1随机扩增多态性DNA(RAPD)该技术用一个(有时用两个)随机引物(一般8~10个碱基)非定点地扩增DNA片

6、段,然后用凝胶电泳分开扩增片段。不需要DNA探针,用一个引物可扩增多个片段,技术简单,只需少量的DNA样本,成本较低,RAPD标记一般是显性遗传(极少数是共显性),但是RAPD分析中重复性不高,由于共迁移的存在,在不同个体中出现相同分子量的滞后,并不能保证这些个体拥有同一条(同源)的片段实验步骤PCR→电泳→分析应用RAPD可用于对整个基因组DNA进行多态性检测,也可用于构建基因组指纹图谱。1、品种鉴定、系谱分析:用于识别种群、家族、种内或种间的遗传变异,为生物血缘关系或分类提供依据,还可以分析混合基因组

7、样品等。2、基因定位:例如定位了莴苣霜霉病抗性基因。RAPD技术的发展和相近的分子标记种类DAF(DNAamplificationfingerprinting):与RAPD技术不同的是,在DAF分析中,引物浓度更高,引物长度更短(一般5~8个碱基)只有两个温度循环,并且往往用聚丙烯酰胺凝胶电泳,DAF通常会产生非常复杂的带型。在DAF技术的基础上,又展出ASAP技术。AP—PCR(arbitrarilyprimedpo[ymerasechainreaclion):在AP—PCR分析中,扩增分为三个部分,每

8、个部分要求的条件和组分的浓度存在差异;在第一个PCR循环中,引物浓度较高;引物长度不定,并且常常来自为其它目的而设计的引物MAAP(MultipleArbitraryPu‘npliconProfiling):这是Caetano—Anolle(1994)创造的一个词,想用来统称所有这些相关技术,但迄今为止这个词很少使用1.1.2加锚微卫星寡核苷酸(Anchoredmi—cmsatelliteoligonucleotides)Zi

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。