食品安全地方标准食品中酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄的测定

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1、DBS22吉林省地方标准DBS22/006—2012食品安全地方标准食品中酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄的测定液相色谱-串联质谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/006—2012前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准起草人：刘思洁、范明、李青、张冠英、杨大鹏。IDBS22/006—2012食品安全标准食品中酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了食品中酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于腐竹、腐皮、豆腐干、海鱼、辣椒及其制品、花椒及其制品中酸性橙、碱

2、性橙2和碱性嫩黄的测定。本标准方法的检出限：酸性橙7.0μg/kg；碱性橙25.0μg/kg；碱性嫩黄5.0μg/kg。2原理以含50%甲醇、1%甲酸和50mmol/L乙酸铵水溶液作为提取溶液，用固相萃取柱对样品进行净化，液相色谱-串联质谱仪测定酸性橙、碱性橙2、碱性嫩黄的含量。3试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1甲酸：色谱纯。3.2甲醇：色谱纯。3.3乙酸铵。3.4氨水：优级纯。3.5提取溶液：50mmol/L乙酸铵溶液+甲醇+甲酸(49+50+1,v/v）。3.6固相萃取柱平衡溶液：50mmol/L乙酸铵溶液+甲酸(99+1,v/v）。

3、3.7淋洗溶液：50mmol/L乙酸铵溶液+甲醇+甲酸(94+5+1,v/v)。3.8洗脱溶液：氨水-甲醇溶液(5+95,v/v）。3.9样品稀释液：5mmol/L乙酸铵溶液+甲醇+甲酸(49.9+50+0.1,v/v）。3.10标准品：酸性橙（OrangeⅡ,CAS:633-96-5）标准品、碱性橙2（Chrysoidine,CAS:532-82-1）标准品、碱性嫩黄（AuramineO,CAS:2465-27-2）。纯度均≥99%。3.11标准储备液：准确称取0.0100g酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄标准品，用50%甲醇水溶液溶解并定容至10.0mL。-20℃以下保存。3.12标准工作液

4、：配制酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄混合标准系列，浓度（μg/mL）为：0.4、0.8、2.0、3.2、4.0。3.13微孔滤膜：0.22µm，有机相。3.14WAX固相萃取柱（60mg，3mL）或其他等效柱。4仪器和设备1DBS22/006—20124.1液相色谱-质谱/质谱联用仪。4.2电子分析天平：感量0.1mg。4.3高速离心机（15000r/min）。4.4振荡器。4.5氮吹仪。4.6固相萃取装置。5分析步骤5.1试样制备与保存取混合均匀后的供试样品，作为供试试样，取混合均匀后的空白样品，作为空白试样。5.2提取称取1.0g试样于50mL离心管中，加入10.0mL提取溶液（4.5），

5、超声提取30min，10000rpm离心10min，上清液转移至另一离心管中；残渣中加入10.0mL提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。5.3净化取5.0mL样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液（4.6）稀释定容至50.0mL，过WAX固相萃取柱（3mL甲醇、3mL水、3mL固相萃取柱平衡溶液活化），用2mL淋洗液（4.7）、2mL水淋洗，5mL洗脱液（4.8）洗脱，收集洗脱液，氮气吹至近干，用样品稀释液（4.9）定容至1.0mL，过0.22μm滤膜后液相色谱-串联质谱测定。5.4基质加标工作曲线的制备称取1.0g空白样品基质于50mL离心管中，称取6份，分别加入标准系列溶液100μL，按6.

6、2和6.3进行操作，制备基质加标标准工作曲线，酸性橙、碱性橙2和碱性嫩黄浓度（ng/mL）为：0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0。5.5测定5.5.1色谱参考条件色谱柱：C18(2.1mm×50mm，1.7μm)或相当者。柱温：40℃。流动相：A相：含0.1%甲酸的5mmol/L乙酸铵水溶液；B相：乙腈。梯度洗脱情况见表1。表1梯度洗脱程序时间（min）流动相A流动相B0.090105.010906.010902DBS22/006—20126.5901010.09010进样量：5μL。流速：0.3mL/min。5.5.2质谱参考条件离子化方式：碱性橙2、碱性嫩黄，ESI

7、（+）；酸性橙ESI（-）；扫描方式：多反应监测MRM；毛细管电压：3.5kV；源温度：110℃；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量650L/h。质谱分析优化参数见表2。表2酸性橙、碱性橙2、碱性嫩黄保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量。化合物锥孔电压（v）母离子（m/z）子离子（m/z）碰撞能量（eV）酸性橙20329.1127.8*35155.920碱性橙222213.1121.1*207718碱性嫩黄25