清肝开窍祛风法对电点燃模型大鼠cfos蛋白表达的影响

《清肝开窍祛风法对电点燃模型大鼠cfos蛋白表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、清肝开窍祛风法对电点燃模型大鼠c-fos蛋白表达的影响【摘要】　　目的研究清肝开窍祛风法对电点燃癫痫大鼠模型的c-fos蛋白的影响。方法将利用改良的Goddard方法造模成功的电点燃大鼠癫痫模型随机分为五组：模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组。另取6只作为正常组，在造模成功后连续给予相应的药物28天后进行电刺激诱发癫痫，2h后取海马区脑组织用免疫组化法测定Fos蛋白。结果免疫组化试验显示：大鼠电点燃癫痫模型大脑皮层、海马c-fos阳性细胞较正常组表达增强，密集分布，染色较深；而4个药物治疗组则表达明显减少，分布稀疏，染色较浅。结论清

2、肝开窍祛风法能抑制Fos蛋白的表达，各剂量组与西药组疗效相当，但治疗组各指标均未完全恢复到正常对照组水平。【关键词】癫痫电点燃模型　清肝开窍祛风法　c-fos蛋白　细胞凋亡7　　　癫痫是神经科的常见疾病，据统计我国每年约有65～70万新发癫痫病人，全国共有癫痫病人超过600万,目前癫痫的治疗以药物为主，原有一线抗癫痫药物，仅可使80%的患者发作得以控制，并有明显的毒副作用，对行为、认知功能有负面影响，还存在不同程度的耐受性，新型二线抗癫痫药及手术疗法有其严格的适应证，经济费用高昂，临床疗效难以肯定。故我们在长期的临床基础上以清肝开窍祛风立法，采用经验方宁

3、痫煎剂治疗癫痫，观察该药对电点燃模型大鼠c-fos蛋白的表达的影响，现总结如下。1材料与方法1.1实验动物健康成年SD大鼠60只，雌雄各半，体重180～220g，由成都中医药大学实验动物中心提供（合格证号：川实动管质第9号）。1.2试剂用青黛、石菖蒲、全蝎（四川省医药公司提供）为方，经成都中医药大学附属医院药剂加工厂煎煮、回收挥发性成分、浓缩，制成每毫升含原生药1g。丙戊酸钠口服溶液（杭州赛诺菲德拉堡民生制药有限公司H20041435）；戊巴比妥钠（国药集团化学试剂有限公司WH20050411）；免疫组化试剂盒（北京莱博生物实验材料研究所目录号：LA03

4、47）。1.3大鼠电癫痫模型的复制按照李昱［2］造模方法，制造电点燃模型癫痫大鼠，痫性行为评定根据Racine分级法［1］，大鼠出现4级及以上痫性行为（包括4级），并记录到AD即视为点燃［2］。1.4动物分组7SD大鼠自由饮水和摄食1周后，选取体重230～300g大鼠造模，将造模成功的大鼠随机分为5组：模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组各8只，西药对照组6只。另选6只作为正常对照组。1.5给药方法模型复制成功后，观察大鼠行为，出现一次非诱发性的癫痫发作后开始给药，其中中药低剂量组为成人等效量的5倍［2.5g/（kg·d）］，中药中剂量组为成

5、人等效剂量的10倍［5g/（kg·d）］，中药高剂量组为成人等效剂量的20倍［10g/（kg·d）］。西药组丙戊酸钠以人每天20mg/kg，换算成大鼠的剂量，每天2次灌胃。造模成功后按相应组别连续用药28天。1.6观察内容及检测指标1.6.1一般情况分别观察各组大鼠造模前后及治疗前后的一半状态，包括体重、精神状态、活动情况等。1.6.2Fos蛋白测定治疗观察结束后再一次诱发癫痫，2h后6组全部取样。用4%多聚甲醛PBS缓冲液灌注大鼠，断头取脑，将鼠脑浸泡于4%多聚甲醛PBS缓冲液24h，取海马区层面进行脱水、透明及石蜡包埋，然后进行免疫组化检查。1.7统

6、计学方法7Fos蛋白表达、AD值和体重用SPSS统计软件11.5进行分析处理，采用单因素方差分析；行为观察大鼠的癫痫发作情况用Radit分析。2结果2.1一般情况大鼠造模后，活动明显减少，进食进水量减少，蜷卧，时有湿狗样抖动，毛发直立、杂乱，体重下降（消瘦），1周后，活动较上周稍增加，但活动迟缓，时有呆立，饮食较前一周增多，体重无明显变化。给药组治疗1周后毛发较前光整，精神状态好转，进食进水增加，活动增多，3周后活动自如，体重增加。2.2Fos蛋白测定大鼠电点燃癫痫模型大脑皮层、海马c-fos阳性细胞较正常组表达增强，密集分布，染色较深，多见褐色颗粒；而

7、4个药物治疗组则表达明显减少，分布稀疏，染色较浅。见表1。表1各组大鼠c-fos蛋白表达平均灰度的比较注：与模型组比较，▲▲P<0.013讨论中医认为本病的形成，大多由于先天因素、七情失调、饮食不节、劳累过度、头颅外伤、手术或虫体寄居，以及其他疾病之后，现代更有药害因素，造成肝、脾、肾等脏损伤，使脏腑功能失调，气机紊乱，痰浊阻滞，瘀血瘀阻，或风阳内动所致。《黄帝内经素问·卷二十一·六元正纪大论篇第七十一》曰：7“木发之郁，太虚埃昏，云物以扰，大风乃至，屋发折木，木有变。故民病胃脘当心而痛，上支两胁，膈咽不通，饮食不下，甚则耳鸣眩转，目不识人，善暴僵

8、仆”。《素问·至真要大论》病机十九条：“肝者中正之官，谋虑出焉；胆者将军之官，决