肝癌相关基因芯片的研制与应用

《肝癌相关基因芯片的研制与应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中科技大学同济医学院博士学位论文肝癌相关基因芯片的研制与应用中文摘要.研究的意义肝癌是世界上最流行的10种肿瘤之一，居我国癌症死因的第二位。估计全球每年至少有25万新发病人，其中40%发生在中国。它的发生发展是一个复杂的多病因、多阶段、多因素参与的过程。其中抑癌基因的突变缺失、癌基因的异常扩增与表达、多基因的协同作用、基因本身的多效性以及机体免疫因素决定最终肿瘤表型的表达。基因芯片技术为研究肝癌发生发展中的基因开关及表达程度提供了强有力的工具，利用它可随时获取肝癌细胞生长各期与肝癌生长相关的基因表达模式，确定肝癌

2、发生发展中基因的突变位点;根据基因型对肝癌进行分类，确定肿瘤的分子病理亚型;通过对药物作用靶点以及新药的筛选，开拓有针对性的个体化治疗。由此可见，基因芯片在对肝癌分子机制、临黔Wi治疗中的研究具有非常重要的应用价值。2·研究方法“目的)本课题的研究是在北京博奥生物芯片有限责任公司暨国家生物工程中心北京生物芯片研发中心完成的.利用公司现有的技术条件，结合肝病研究所的资源，研制肝癌相关基因芯片，利用基因芯片检测有不同遗传特性的肝癌细胞株间及其与正常肝细胞株间的基因表达差异，观察肝癌不同遗传特性相关的特异基因。同时利用该

3、芯片检测肝癌组织与癌旁肝硬化组织的基因表达差异，对肝癌发生发展过程中基因表达变化进火行初步的探索。.研究成果1成功构建了肝癌相关基因芯片(4224点)研制成功了肝癌相关基因的cDNA芯片。该芯片包括有1795个肝癌相关基因、300个癌基因与抑癌基因、117个细胞周期相关基因、105个凋亡相关基因、257个信号转导与离子交换相关基因、376个转录因子相关基因以及细胞因子相关基因和肝组织来源的基因等等，其中对115的基因进行了测序验证。3.2检测了不同肝癌细胞株之间及其与正常肝细胞株的基因表达差异华中科技大学同济医学院

4、博士学位论文肝癌细胞株包括有HepG2,整合了人HBV基因组的2.2.15细胞，有抑癌基因p53突变且有高转移特性的MHCC97细胞。正常肝细胞株选择上海细胞生物学实验室分离培养的成人肝细胞L02。在实验中，将HepG2与2.2.15细胞进行了基因差异的检测，每种肝癌细胞株分别与正常肝细胞1..02也进行了基因表达差异的比较，得到的数据使用Lowess的方法进行归一化处理，在95%置信区间内挑选表达差异的基因，这些基因主要涉及到细胞周期、凋亡、信号转导与代谢酶等多方面，差异的基因表达体现出肝癌细胞特异的遗传分子背景

5、。研究的数据已经进行了分析验证。数据结果基本上可分为两类，一类为国内外己报导的在肝癌中存在高表达的基因，说明实验的技术手段与数据分析方式是正确的;一类为尚未在肝癌中有特异改变报导的基因;它的临床价值正在分析研究之中。3.3检测了肝癌与癌旁肝硬化级织间基因的表达差异对8例肝癌及其对应的癌旁肝硬化组织基因表达差异进行了检测，其中3例组织对在摸索实验条件中损失，有5例组织有较好的杂交效果。经过Lowess的方法进行归一化后，在95%置信区间内挑选表达差异的基因，其中有26个基因在肝癌组织中表达增高，10个基因在肝癌组织中

6、表达降低，通过使用相对基因表达比值(Cy5/Cy3)，判断了4164个特殊基因不同的表达形式在肝癌中的相关性，我们发现，根据肝癌组织分化程度可以对基因进行聚类分析。尽管我们的实验病例还需要积累，但是我们的研究仍然为探讨f癌的发病机制·诊断治疗的研究提供了重要线索·4.研究总结了成功地搭建了制备肝癌相关基因芯片的工作平台，研制了针对性强的肝癌相关基因芯片，利用该芯片检测了肝癌细胞株之间及其与正常肝细胞之间，肝癌组织与癌旁肝硬化组织间的基因表达差异。通过严格的数据分析，筛选了差异表达的基因，这些基因主要涉及到细胞周期、

7、凋亡、信号转导与代谢酶等多个方面。这项研究不仅可以有助于阐明肝癌发生的分子机制，同时也可探讨肝癌的诊断与治疗的策略。因此，本研究所制备的肝癌相关基因芯片是一种灵敏的、高通量的检测基因表达的工具，通过对基因表达差异的检测探讨了肝癌形成的分子机制，为今后深入研究肝癌的发病机制以及寻找肝癌治疗靶点提供了可靠的实验依据。【关键词】:肝癌基因卜-VD13A片差异表达叙讥华中科技大学同济医学院博士学位论文Constructionandapplicationoflivercancerrelatedmicroarray1.Rese

8、archSignificanceLivercanceristheoneoftenmostpopularcancersallovertheworld，bringaboutthesecondmortalitycaused勿cancer.Itisestimatedthattherearealmosttwohundredfiftythousandnewlypatie