中国卤虫胚胎滞育解除过程中aktpkb基因的作用及表达模式

《中国卤虫胚胎滞育解除过程中aktpkb基因的作用及表达模式》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：i孤二登学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采

2、用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者虢豫7飞指导教师签名：j睁LL签名目期：3,o／并Z月弓日辽宁师范大学硕士学位论文摘要本文采用RACE技术以中国卤虫为实验材料对akt的eDNA全长序列进行了研究，利用原位杂交技术和实时荧光定量PCR技术分别对中国卤虫As-akt基因的表达部位以及As-akt矛BAs-pdk-(3一phosphoinositide—dependentproteinkinase—1)在中国卤虫不

3、同胚胎发育时期、盐度和温度胁迫中的表达量进行研究。中国卤虫(Atteml"asinica)广泛分布于盐湖、盐田等高盐水体中，由于含有较高的不饱和脂肪酸和蛋白质等特点，是水产养殖中重要的开口饵料。中国卤虫的生殖方式存在卵胎生和卵生两种方式。当环境胁迫时，中国卤虫以卵生方式产生滞育胚胎(滞育卵)，以对抗干燥、寒冷、冰冻等恶劣环境，以减少不良环境对胚胎的影响。此时，胚胎停止发育，新陈代谢减慢。因此，滞育在中国卤虫应对环境胁迫，保护胚胎存活的的过程中起着非常重要的作用。丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt也被称做蛋白激酶B(PKB)，

4、是细胞内非常重要的一种信号分子。Akt在细胞生长，增殖，分化，运动，葡萄糖稳态，细胞存活以及细胞凋亡等多种胚胎发育过程中发挥着重要的作用。但对于akt基因在中国卤虫滞育解除过程中、胚胎发育过程中以及高盐、低温胁迫下的表达未见报道，有待进一步深入研究和分析。分子克隆和生物信息学的实验结果证明，中国卤虫的akteDNA全长序列为1613bp，它包括1416bp的开放阅读框(openreadingframe，oRF)这段序列编码472个氨基酸序列。使用ClustalX和MEGA4．0软件对中国卤虫akt基因的氨基酸序列与其

5、他物种该基因的氨基酸序列进行分子进化分析，使用多种在线软件对As-akt基因的氨基酸序列的信号肽、跨膜区域、亲疏水性以及磷酸化位点等进行分析。Akt分子量为54．41kD，理论等电点为7．97。原位杂交实验结果显示在Oh-20h在胚胎中均匀分布，在40h，3d，5d主要分布在头部、胸部、腹部以及附属物质里。实时荧光定量PCR实验结果显示As-akt和As-pdkl在中国卤虫胚胎发育的各时期相对表达量不同，在原肠胚阶段、后无节幼体阶段和拟成虫阶段表达量较高。在高盐和低温胁迫下随着盐度的提高和温度的不断降低As-akt和

6、爿s节幽_『的相对表达量明显升高。上述这些结果均显示As-akt在中国卤虫抵抗细胞凋亡和在胚胎滞育解除过程中中发挥了极其重要的作用。因此，研究As-akt基因在中国卤虫中的表达模式对研究卤虫的胚胎滞育解除的分子机制具有重要的理论意义，对卤虫资源的进一步开发利用有一定的潜在应用价值。关键词：As-a／ct；中国卤虫；表达模式；滞育解除中国卤虫胚胎滞育解除过程中akt／pkb基因的作用及表达模式TheRoleandExpressionPatternofAs-akt／pkbGeneduringDiapauseTermina

7、tionofArtemiasinicaAbstractInthisstudy，RACEtechnologywasusedtoisolatecDNAsequenceofthea幻homologofArtemiasinica(As-aM)．InsituhybridizationtechnologyandReal-timePCRtechnologywereusedtostudyAs-aktexpressionsiteandtheexpressionofAs-aktandAs-pdklduringembryonicdevel

8、opment，salinityandtemperaturestress，respectively-．Artemiasinicaliveinhighsalinitywaterworldwide，becauseofitcontainshighunsaturatedfattyacidsandhighproteincontent，itregardsas