Surfactin体外抗肿瘤机理研究

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1、分类号：Q279密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：08813016Surfactin体外抗肿瘤机理研究ResearchontheAnti．tumorMechanismofSurfactininVitro专业名称：营养与食品卫生学(医)指导教师姓名：曹小红教授(副教授)研究生姓名：赵思思申请学位级别：医学硕士论文提交同期：2010年12月论文课题来源：国家项目学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集

2、体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：乱况目日期：刀f7年弓月f妒日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学：所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到

3、本声明的法律后果由本人承担。作者签名：越融鼠日期：Ⅺ11年弓月，毕日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密ll(请在方框内打“√”)，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密lV(请在方框内打“、／”)。作者签名：氩鹏甩导师签名：、掳¨PH期：如If年；月Itt-H同期：hj6}f年

4、垆【髟娃■，f／’r摘要实验采用的枯草芽孢杆菌BacillusnattoTK-1发酵产生的脂肽——su渤ctin，被广泛认为是一种安全高效的生物表面活性剂。它具有显著的抗菌，抗肿瘤，抗病毒及溶解血栓等功能，其中关于抗肿瘤和抗病毒功能的研究较少。课题组经过前期实验发现，surfactin能够通过线粒体途径诱导MCF一7乳腺癌细胞发生凋亡。线粒体通透性转换孔(MPTP，简称PT孔)作为细胞的“生命闸门”，在细胞凋亡过程中发挥着至关重要的作用。本文主要探讨PT孔在surfactin诱导的MCF．7乳腺癌细胞凋亡过程中的作用机理，以及ERK／MAPK通路与细胞增殖和凋亡的关系。

5、surfactin诱导MCF一7乳腺癌细胞的PT孔开放与细胞凋亡的关系及作用机理，以及，ERK／MAPK通路对于肿瘤细胞生长增殖的影响。本论文以体外培养的人乳腺癌MCF．7细胞株为研究对象，探讨surfactin对肿瘤细胞增殖和凋亡的作用，并深入探讨相关的作用机理。体外增长抑制实验表明，surfactin能显著抑制MCF．7乳腺癌细胞的增殖，这种抑制作用呈现出浓度和时问依赖关系，作用24h的IC50是40．2pg／mL，作用48h的IC50是32．3“∥mL。HE染色法和AO／EB、Hoechst33342／PI荧光双染发现，surfactin诱导MCF．7细胞发生典型

6、的凋亡形态学改变。实验采用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察发现，经surfactin作用后，MCF一7细胞内的活性氧(ROS)水平和胞内游离钙离子(Ca2+)水平显著升高，这一趋势分别可被ROS抑$O齐IJNAC和胞内Ca2+螯合剂BAP7rA—AM所抑制，且Ca2+水平的升高是lhROS的大量生成所致。同时发现，ROS的升高将会导致PT孔的开放，PT孔专一性抑制剂CsA可以抑制其开放，PT孔的丌放直接引起线粒体跨膜电位(△甲m)的显著降低，这一趋势可被NAC、BAPTA—AM矛FICsA所抑制。通过免疫印迹(Westernblotting)实验发现，PT孔开放后，线粒

7、体内细胞色素C(CytC)减少，而胞浆内的CytC则逐渐增多，胞caspase一9蛋白的表达量也随之增加。此外，p-ERK蛋白表达量降低，Bcl．2蛋白表达量也随之下调。综上所述，surfactin具有诱导MCF一7肿瘤细胞发生凋亡的作用，其凋亡机制可能与线粒体途径及PT孔的丌放有关。另外，ERK／MAPK通路参与了surfactin对MCF．7细胞的增赔抑制作刖。关键词：Surfactin：PT孔；Ca2+；ROS；ERK／MAPK通路AbstractBacillusnaUoTK～wasusedtoproduceakindoflipop