松材线虫携带致病细菌产生的毒素的初步研究

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1、南京林业大学硕士学位论文松材线虫携带致病细菌产生的毒素的初步研究姓名：梁波申请学位级别：硕士专业：森林保护学指导教师：赵博光2003.6.1摘要f在对松材线虫携带的细菌所产生的致萎毒素的研究中，建立一种灵敏、高效的生测方。／≮E；各个关键。本研究以松材线虫病高度感病寄主一黑松为生测材料，建立起单细胞荧光显示法和切根苗表面消毒生测法。生测结果显示，松材线虫携带的假单胞菌PN]、泛菌PAlll和P1细菌毒素均有较强的毒性，其中PNl细菌毒素的毒性最强。单细胞荧光显示法方法简单，结果稳定，为今后对松材线虫携带细菌的致萎毒素的分离、鉴定工作提供了基础和前提。接种松材线虫对黑松

2、木段和愈伤组织pH值的影响结果表明，松材线虫携带的微生物在松材线虫病发病过程中寄主体内pH值降低这一过程中发挥了很大的作用。人工接种松材线虫后枯死及半桔死的黑松松枝水提液的pH值及毒性测定结果表明，随着病程的进展，黑松松枝水提液的酸性有增强的趋势，当发生松材线虫病时，黑松树体内存在着可令黑松细胞致死的毒性物质。，人工接种无菌松材线虫及细菌后愈伤组织水提液的毒性测定结果表明松材线虫可促进细菌的产毒作用氇H菌毒素原液中添加松材线虫对其毒性的影响结果表明细菌毒素原液中添加无菌松材线虫后对其毒性并无显著影响。可推论，松材线虫本身不产生毒素，不作用于其携带的细菌所产生的毒索，不

3、能促进细菌毒素的毒性，但可作用于其携带的致病细菌，促进细菌的产毒作用。细菌培养天数对PNl毒素原液毒性的影响结果表明，随着培养天数的增多，PNl毒素原液对黑松单细胞的毒性逐渐增强，当培养4d时，其毒素原液的毒性的升高已几乎进入稳定期，因此在假单胞菌PNl细菌毒素的分离鉴定工作中可将培养4d作为PNl的培养时间。对PNl毒素原液透析及透析后各组分的毒性测定结果表明PNl细菌毒素并不是单一化合物。对PNl毒素原液分级盐析及盐析后各组分的毒性测定结果表明PNl毒素原液在硫酸铵饱和度为30％和90％时的沉淀组分可能均含有可使黑松单细胞致死的毒素蛋白类物质。关键词：松材线虫病；

4、松材线虫；致病细菌；单细胞荧光显示法；假单胞菌PNl；毒素PreliminarystudiesonthetoxinsproducedbythepathogenicbacteriacarriedbyBursaphelenchusxylophilusAbstractSensitiveandefficientbioassaymethodsaremostimportanttothestudiesonthetoxinsproducedbythepinewoodnematode—carryingpathogenicbacteria．Twonewbioassaymethods，si

5、nglecellsfluorescencebioassayandsurface—sterilizingbioassayofseedlingswithrootcut，Whichweredeveloped0n也ematedalofhi出ly—susceptiblePinusthunbergii，weredescribedinthisPapeLAllthetoxinsofPNl(尸_eudomonassp．)，PAlll(Pantoeasp．)andPI(Pantoeasp．)whichwereisolatedfromBursaphelenchUSxylophilussho

6、wedpathogenicitytoPthunbergiisinglecellsandseedlingswithrootcut．amongwhichthePNltoxinswerethemostpathogenic．SinglecellsfluorescencebioassayCanbeappliedinthestudiesontheisolationandidentificationofthetoxinsofpineW001inematode—carryingbacteria，sinceitsproceduresweresimpleanditsobservatary

7、datastable．ExperimentsshowedthatthepHvaluesofPthunbergiiblocksandcallousdecreasedWheninoculatedwithpinewoodnematodes．Itindicatedthatthemicrobescardedby丑．xylophilusplayedanimportantroleinthedecreaseofthepHvalueinthepinetrees’body．TherewasatrendthattheacidityofthewaterextractofPt