温病湿热证大鼠模型肝线粒体KNaATP酶活力变化的对比研究

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1、温病湿热证大鼠模型肝线粒体K+-Na+-ATP酶活力变化的对比研究作者：程方平刘松林李云海周璇梅国强【摘要】［目的］探讨多因素复合造模方法对模型大鼠能量代谢的影响。［方法］分为正常组、湿热模型组（高脂+高温高湿+大肠杆菌）、模型对照组（普食+高温高湿+大肠杆菌）；运用定磷法测肝线粒体Na+-K+-ATPase活性。［结果］模型组与模型对照组肝线粒体Na+-K+-ATPase活性均较正常组显著降低，但两者比较无显著性差异。［结论］肝线粒体Na+-K+-ATPase活性显著降低，是湿热证模型的病理基础之一，与是否高脂饮食无关。【关键词】温病；肝；线粒体；酶活力；K+-Na+

2、-ATP；湿热证；大鼠　　Abstract:［Objective］Toexploretheeffectsofthemodelestablishmentmethodsonenergymetabolismindicatorsofmodelrats.［Methods］Setupnormalgroup,modelgroup(highfatdiet+hightemperatureandhighhumidity+colonbacillus)，contrarygroup(routinediet+hightemperatureandhighhumidity+colonbacillus)

3、，theactivityoflivermitochondria8Na+-K+-ATPasewasdetectedbyprincipleofdeterminesthecontentofphosphorus.［Results］TheNa+-K+-ATPaseactiveinmodelgroupwasremarkablydecreased，andhadnosignificantlydifferencefromcontrarygroup.［Conclusion］ThelivermitochondriaNa+-K+-ATPasebeingremarkablydecreasedis

4、oneofpathologicalbasisofdamp-heatmodel，un-relatedwithhighfatdiet.　　Keywords:febriledisease;liver；mitochondria；enzymeactivity;K+-Na+-ATP;damp-heatsyndrome；rat湿热既是中医特有的致病原因，又是具有广泛临床基础的中医病证，涉及多系统、多器官、多组织的病变。为了进一步揭示湿热证的本质，我们模拟湿热发病原因，观察环境、生物因素对模型大鼠肝线粒体Na+-K+-ATPase活性的影响。　　1实验材料　　1.1实验动物　　清洁级w

5、istar大鼠，雌雄各半，体重200g±10g。由湖北省医学实验动物中心提供。8　　1.2药物及试剂　　(1）大肠杆菌：菌种号：AB94013。武汉大学微生物保藏中心提供。湖北中医学院微生物室复壮、培养，应用浓度为109/ml，4℃冰箱保存。（2）高脂饲料：胆固醇、胆酸钠，武汉亚法生物技术有限公司提供。配方：普通饲料+胆固醇25g/kg+胆酸钠2g/kg+蛋黄粉80g/kg+猪脂100g/kg。（3）ATP酶测试盒：南京建成生物工程研究所。　　1.3实验仪器　　人工气候箱SHH-500GS型，重庆市永生实验仪器厂，电子体温计上海医用仪器厂，台式低温高速离心机TGL-16

6、G-A，上海安亭科学仪器厂，721分光光度计16C14型，上海精密科学仪器有限公司。　　2实验方法　　2.1动物分组　　常规喂养3d，随机将24只大鼠分为：正常组、湿热模型组（高脂+高温高湿+大肠杆菌）、模型对照组（普食+高温高湿+大肠杆菌）。8　　2.2造模方法　　正常组：在正常温湿度（温度24～28℃，相对湿度60%～75%）环境下，普通混合饲料喂养29d。湿热模型组：在正常温湿度环境下，高脂饲料喂养2周后，再放入人工气候箱中（温度35℃，相对湿度95%），每天造模时间（上午8～12时，下午13～17时），高脂饲料喂养。12d后，灌服大肠杆菌109/ml·200g-

7、1（预实验摸索剂量）。4h后，再加强灌服1次，继续放入人工气候箱造模观察3d。模型对照组：过程同湿热模型组，整个过程普食喂养。　　2.3标本采集　　分别于湿热模型组、模型对照组灌服大肠杆菌（浓度109ml·200g）后72h，脱椎处死大鼠。迅速剖腹取各组肝组织置于4℃生理盐水中，洗去表面的残血，滤纸吸干，取大鼠肝脏6g，放入盛有10%福尔马林的容器中，存-20℃冰箱中。取肝组织1g，剪碎，按重量体积比，加入分离介质（内含蔗糖0.3mol/L，HEPES5mmol/L，EDTA0.5mmol/L，PH7.4）制备成10%的组织匀浆，随后以3