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1、现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2010,Vol.26,No.2地衣芽孢杆菌2709蛋白酶分离纯化与性质张浩，张帅，张娜，马永强（哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江哈尔滨150076）摘要：采用盐析、DEAE阴离子交换层析、凝胶层析等步骤，从地衣芽孢杆菌(B·licheniformis)2709的发酵液中获得了电泳纯的碱性蛋白酶。结果发现：提纯酶的活力达61069U/mg，纯化倍数：38.7，活性回收率：19.3%，去酰氨度：20.9%.并研究了该酶的基本酶学特性，碱性蛋白酶最
2、适反应温度为50℃，最适作用pH为10.0。40℃保温2h后该酶保持80%以上的活力，在pH8~11之间有较高的pH稳定性。关键词：碱性蛋白酶；提纯；去酰氨；性质文章篇号:1673-9078(2010)2-129-132PurificationandpropertiesofalkalineproteasefromB.licheniformis2709ZHANGHao,ZHANGShuai,ZHANGNa,MAYong-qiang(CollegeofFoodEngineeringofHarbinCommercialUn
3、iversity,Harbin150076,China)Abstract:ThealkalineproteasewaspurifiedfromB·licheniformis2709byalcoholprecipitation,ammoniumsulphateprecipitation,DEAEionexchangechromatography,andgellayerchromatographyandthepurifiedalkalinewasdemonstratedtobeelectrophoreticbySDS-P
4、AGE.Theresultsindicatedthattheenzymeactivityofpurifiedproteasewas61069U·mg-1withfinalpurificationfactor,activityrecoveryfactoranddeamidationreateof38.7,19.3%,and20.9%,respectively.Theoptimalconditionsforthehighestactivityofalkalineproteasewereasfollows:pH10.0,a
5、ndtemperature50℃.Afterincubationat40℃for2h,theresidualactivityoftheenzymewasabove80%,andtheenzymewasrelativelystableatpH8-11.Keywords:alkalineprotease;purification;deamidation;properties129现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2009,Vol.26,No.2我国是大豆的故乡，品种资源极为丰富1材料
6、与方法，产量极大，尤其北方种植甚为广泛，大豆的加工历史十分悠久，早在2000多年前，在1.1材料与设备中华民族的繁衍与发展过程中，大豆制品具地衣芽孢杆菌(B·licheniformis)2709，中国有不可磨灭的贡献。然而，大豆蛋白在现代工业微生物菌种保藏中心提供；大豆分离蛋食品加工中的应用受到了一定的限制。这是白，由哈高科提供；KYC-因为：首先，大豆蛋白的功能性质还不能满100型恒温摇床，北京晨曦勇创科技有限公司足现代食品加工的需求，不同的食品对功能；LRH-性质的要求不同，某些功能性需要加强或减250生化培养箱
7、，上海一恒科学仪器有限公司弱；其次，大豆蛋白的功能特性是与其结构。DYY-III-密切相关的，要获得具有良好功能的大豆蛋8B电泳仪，北京六一仪器厂；SW-LJ-白制品，就必须要求原料大豆蛋白有高的溶2FD型超净工作台，苏州净化设备有限公司。解性、分散性[1]，而大豆蛋白中的11S球蛋白1.2实验方法（占大豆蛋白总含量的31%以上）的溶解性1.2.1培养基较差。为此，加强或改善大豆蛋白的功能特斜面培养基：牛肉膏1.0性，特别是提高大豆蛋白的溶解性已成为食g，蛋白胨1.0g，NaCl0.5g，琼脂2.0品加工业亟待解决的
8、问题。地衣芽孢杆菌属(g，蒸馏水100mL，pH7。B·licheniformis)微生物所产碱性蛋白酶,具有平板培养基：牛肉膏0.5g，蛋白胨1.0较强g，NaCl0.5g，琼脂1.5g，蒸馏水100收稿日期：2009-09-25mL，pH7.2。基金项目：国家科技部863课题（2006AA10Z329）；黑龙江省研究生创新种子培养基：牛肉膏
