肝细胞肝癌中TRAILR的表达及TRAIL的抗癌作用研究

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1、华中科技大学博士学位论文肝细胞肝癌中TRAILR的表达及TRAIL的抗癌作用研究姓名：何松青申请学位级别：博士专业：外科学、普外指导教师：陈孝平2003.4.1竺!型苎查!竺塑!!堡——』!_!!坐前言肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactorrelatedapoptosis—inducingligand，TRAIL)属TNF超家族新成员，能与其相应受体(TRAILreceptor，TRAILR)结合，启动细胞内的信号转导，激活Caspase级联反应诱导细胞凋亡。TRAIL蛋白是一种II型糖蛋白，分子量为32．5KD，等电点7．63，其C末端的胞外区与TN

2、F家族的其它成员有着较高的同源性。TRAIL广泛表达于正常人的多种组织中，胞外区形成可溶型同源三聚体的亚结构，作用于其相应受体而发挥生理效应。膜结合型TRAIL(全长的TRAIL)和可溶型TRAIL(胞外区C端的114—281位氨基酸)在体外均能诱导多种肿瘤细胞的凋亡，作用谱广。TRAIL通过与靶细胞表面的受体特异性结合而发挥作用。目前己发现的TRAILR有五种两大类，包括TRAILRl／DR4，TRAILR2／DR5／TRICK2／killer，TRAILR3／DcRl／TRID／LIT，TRAILR4／DcR2／TRUND，OPG(osteoprotegerin)。死亡受体(d

3、eathreceptor，DR)DR4和DR5具有与TNF受体超家族其它成员类似的胞浆死亡区，与TRAIL特异性结合后可通过死亡结构域激发和传递凋亡信号，激活caspase蛋白酶解级联反应，导致细胞死亡。诱捕受体(decoyreceptor，DcR)DcRl和DcR2的胞外区均有2个与DR4、DR5高度同源的富含半胱氨酸的重复序列，能够与TRAIL结合。但是DcRl无胞内区：DcR2的胞内死亡区不完整，呈无功能的截断状态。因此DcRl和DcR2与TRAIL结合后都不能传导凋亡信号，其可溶性形式能与DR4／DR5竞争同TRAIL结合，抑制配体介导的细胞凋亡，OPG在体内有抑制破骨和增

4、加骨密度的功能，并与TRAIL有交叉性调节作用，OPG为一个可溶性的胞外受体，不能诱导细胞凋亡，并能与DR竞争与TRAIL结合，故可作为诱捕受体起作用。研究表明，TRAIL可能主要通过两条不同的信号通路调控凋亡．其一是通过caspase传递凋亡信号，其二是通过活化NF—KB进行基因诱导调控。抑制TRAIL诱导的NF—KB活化可增强TRAIL诱导的凋亡，并减弱细胞对TRAIL诱导凋亡的抵抗力。死亡受体DR4或DR5通过其胞外区与TRAIL结合并活化后，其胞内的死!!璺苎圭兰苎煎!!堕一———旦皇∑羔!i丝曼亡结构域相凝聚集，并逃一步通过同螬作用募集结合器骚自(FADD)。FADD接收

5、到瑟亡受髂簧遴熬凋亡痿弩惹+将雩

6、起魏肉ca$pase黪藏髂帮procaspase在萁窳壤静髑部募集鞠串联缀含，扶蕊形成“TRAIL-DR4、DRS-FADD-procaspase分子”大分子复台体，即凋亡酶体(apoptosome)。凋亡酶体形成后，其分子中的procaspase逶过鑫身拳瓣蘸藏隽存活甄豹caspase，并滋一步激活caspase级联爱窿。在TRAIL介导静掇亡串，雷先被激活静常豢是caspase-8。caspase-8在其结秘域孛含有两个死亡效应区(deatheffectdomain，DED)，这使其具衡强大的死亡效成激发翻转簿功麓。caspase-8辫纯基黢够

7、弓

8、发caspase爨鑫酶释缀联爱瘟，并遴一步键斌承解激溅箕下游瓣困源酶，燕caspase-6、caspase一7簿，最瑟激潘其效旋物caspase“3发生生物效应。caspase的蛋白酶鳃级联反应熊够不麟传递和放大鞠亡麓萼，麸薅雩{发对TRAIL敏感数耀黢发生大蟹、恢逮器礴亡反斑。TRAIL逶过死亡受体DR4、lDR5翻缀受傣OcRl、DcR2赍导的建宅嫠号馋嚣模式见整l、嚣2所永。整l豫A亿陡嬲L逢过廷亡受髂DR4、DR5粒鹱受体DcR!、DcR2舟簿豹簿妻稼弩砖警攘斌。圈2TRAIL满导肿瘤细胞凋亡的特予作用机制同FasL和TNF类似，均通过形成同源兰聚体瓣器霹箕嚣亡受体，孳

9、

10、袭其延安拣梅域DD整挥效癌，飙霹涛鼯娴艇涌亡。!!壁婪查篁苎垫!篁堡．———』兰羔兰坐TRAIl。能介导只表达DR4／DR5的细胞包括肿瘤细胞的凋亡，而正常纲腱在表达DR4／DR5的阅时也表达DcRl、DcR2，免受凋亡。TRAIL仅诱导转化细胞、肿瘤纫臌和疯毒感染缨腿发生凋亡，蕊使正卷缨腿逃逸它的杀伤作用。这一特性预示着荬在治疗肿瘤及瘸毒感染串有广泛的应用蘸景。TRAIL／TRAILR的这莉特异性诱导凋亡作用无疑给胖瘸的治疗带来新的愚路。过去20年，㈣(Hepat