大学分子生物学：DNA的复制

《大学分子生物学：DNA的复制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、DNA的复制Godsaidtothem:“Befruitfulandmultiply！”—《圣经·创世纪》第一节DNA复制概貌一、DNA复制的半保留性二、复制过程中的顺序性复制从原点开始边解链边复制为什么不采取先将DNA全部解链，然后再分别进行复制的方法？三、DNA的半不连续复制冈崎片段的发现DNA只能从5′到3′方向合成不能从两端同时复制3，5－磷酸二酯键的形成第二节DNA的复制酶和相关蛋白一、DNA聚合酶种类：DNA聚合酶I：1956年，Kornberg具有聚合酶、3′-5′外切核酸酶、5′-3′外切核酸酶活性主要生理功能：主要的DNA修复酶，并参与半保留复制Ro

2、ger,Kenneth,Sylvy,ArthurandThomas.DNA聚合酶II：没有5′-3′外切核酸酶活性，次要的DNA修复酶DNA聚合酶III：是真正的DNA复制酶多亚基多层次组装DNA聚合酶IV和V：参与SOS修复DNA聚合酶III的结构：αDNA聚合酶ε3’-5’核酸外切酶θ激活ε外切酶活性τ使核心酶结合为二聚体；结合γ复合物γ结合ATPδ与β亚基结合δ’与γ和δ亚基结合χ与SSB蛋白结合ψ与χ和γ亚基结合βslidingclamp（滑动夹环）核心酶PolIIIPolIII’PolIII*γ复合体βslidingclamp二、解螺旋酶(helicase)

3、：AhelicaseisanenzymethatusesenergyprovidedbyNTPhydrolysistoseparatethestrandsofanucleicacidduplex三、SSB蛋白（单链结合蛋白）Thesingle-strandbindingprotein(SSB)attachestosingle-strandedDNA,therebypreventingtheDNAfromformingaduplex防止单链复性维持单链刚性状态避免单链降解TheSSBbindsasamonomer,buttypicallyinacooperativema

4、nnerinwhichthebindingofoneproteinmoleculemakesitmucheasierforanothertobind四、引发酶(primase):TheprimaseisatypeofRNApolymerasethatsynthesizesshortsegmentsofRNAthatwillbeusedasprimersforDNAreplication.为什么DNA的合成需要RNA引物？五、旋转酶(gyrase)：aTypeIItopoisomerase,actstoovercomethetorsionalstressimposedu

5、ponunwindingbyintroducingnegativesupercoilsattheexpenseofATPhydrolysis.复制叉前进带来扭曲张力拓扑异构酶II：引入负超螺旋六、DNA连接酶（DNAligases）DNAligasemakesabondbetweenanadjacent3’-OHand5’-phosphateendwherethereisanickinonestrandofduplexDNA.1、酶活化2、AMP转移3、3′-OH亲核攻击第三节DNA的复制过程一、原核生物的复制（E.coli）（一）复制的起始：复制原点：OriC，含两

6、个系列的重复单位，3个13bp重复序列（富含AT），和4个9bp重复序列（识别位点）起始过程：TheoriginisinitiallyrecognizedbyDnaAthatformsalargecomplexwithDNA.AshortregionofA·T-richDNAismelted.DnaBisboundtothecomplexandcreatesthereplicationfork.Thefirstnucleotidesofthenewchainaresynthesizedintotheprimer（二）复制的延伸：复制体：酶和相关蛋白在复制叉形成的超分子

7、复合物先导链和后随链的同时复制Laggingtemplatestrand通过复制体形成一个环状结构，primase已经合成一条引物＃2随着冈崎片段的合成，环逐渐变大，直到＃2片段末端接近前一冈崎片段的引物复制体释放环，primase合成一个新的引物（三）、复制的终止：环形DNA：单向复制：复制终点＝复制起点双向复制：无固定终点,两个生长点简单碰撞有固定终点,如E.Coli线性DNA：环化，如λDNA形成连环分子，如T7DNA当E.coli复制叉前移，遇到20bp重复性终止子序列（Ter）时，Ter-Tus复合物能阻挡复制叉的继续前移真核生物复制特点：