《xl测序仪简易维护》PPT课件

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1、3730xl测序原理及特点3730xl测序仪的原理双脱氧链终止法测序原理3730xl测序仪的构造3730xl测序仪的特点测序基本流程3730xl测序仪的应用文库类型及特点Sanger测序法的原理1977年，英国人FredSanger发现，如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。5´磷酸3´羟基3´,5´-磷酸二酯键核苷酸形成3,5-磷酸二酯键示意

2、图核酸序列形成的基础“双脱氧末端终止”的含义TemplatePrimerdNTPPolymeraseTerminatorCGTA终止物标记方法因为颜色不同，4种终止物可以在一起进行反应。3730xlSequenceMap测序反应与PCR的比较PCR测序反应DNA聚合酶Taq酶测序酶引物一对单向底物dNTPdNTP+ddNTP*模板量少质量要求高产物等长的DNA片段相差一个碱基的一系l列片段荧光标记无3’端带荧光标记测序产物指数扩增线性扩增3730xl测序仪的构造遗传分析仪系统组成主机电脑及软件耗材Capillary3730xl测序仪的特点1

3、电进样及电泳1.毛细管和电极深入样品溶液中2.加电压3.荷负电的DNA分子进入毛细管在电场作用下向阳极泳动2荧光激发和检测分别带4色荧光标记的DNA片段从小到大依次经过激光检测区2.激光激发荧光产生长波长的荧光信号3.荧光信号被冷CCD收集4.软件将光学信号转换成电泳图谱专利的荧光检测技术多道毛细管同时检测双束激光激发光栅全波长分光低温CCD实时检测每道毛细管同时检测激发：DualSideIllumination双束激光两侧同时激发：灵敏度+均匀性+超速测序TopbeamBlockedBothBeamsBottomBeamBlocked检测

4、：光栅+低温CCD同步成像支持4色或5色以上荧光，适用于多种商品化试剂盒。更新荧光化学时无需更换任何硬件设备低温CCD有效提高信噪比，准确度高。光栅全波长分光低温CCD实时检测FullyIntegratedSystem3730xl型遗传分析仪双光束激光实时激发荧光全波长实时荧光检测：光栅分光，后置超簿型CCD检测96个样品自动进样及一体化16板自动进样样品架内置样品板条形码自动识别100次（9600个样品）运行试剂一次上机自动碱基识别与质量评分软件长读测序POP-7液体分离胶，动态内镀毛细管电泳温度18-70C可调DNA测序基本流程准备模板

5、：质粒、PCR产物抽样检查DNA浓度和质量，必要时纯化测序PCR反应纯化测序产物变性上机电泳分析数据DNA测序技术应用测序的应用基因组DNA测序cDNA测序未知序列测序已知序列再测序质粒、PCR产物BAC、YAC细菌基因组DNA法医：线粒体DNA测序LongreadwithBigDye®Terminatorv3.1:>1010bp长片段测序ACCGTCTTGACCTCGTACGCATGAACCGTCCTGACCTCGTACGCATGA基因测序的重要工作：杂合子位点识别ACGT杂合子测序杂合子检测：发现新突变位点再测序人类基因组计划的完成，为

6、遗传分析开创了新的研究领域其他物种的测序项目已经启动再测序项目的特点可以更好的理解遗传多样性在疾病中的作用可以在各种规模的实验室中进行，而不是仅限于基因组测序中心要求更高质量的数据基因分析技术在生物、医学、农牧业领域的应用DNA测序人类功能基因再测序细菌、真菌等微生物鉴定；HLA配型基因突变检测SNP检测SNaPshotMultiplexSNPlex二重TaqMan探针片段分析基于STR的法医个体识别与亲子鉴定：HID基于STR的致病基因连锁定位：LMS基因突变筛选：SSCP农牧业育种：AFLP基因表达定量TaqMan探针法与荧光染料法文库

7、类型及特点基因文库（GeneLibrary）基因组文库（GenomicLibrary）cDNA文库（cDNALibrary）基因组文库含有某种生物全部遗传信息的重组DNA分子的克隆总和基因组文库常用的载体及特点质粒载体简单、快速、易于操作，但仅适合一些低等真核生物和原核生物，如：pBR322,pUC18,pGEMλ噬菌体载体由λ噬菌体改建而来，需要在体外包装成噬菌体颗粒，再转染受体细胞粘质粒载体（cosmid)具有质粒和λ噬菌体两种载体的性质人工染色体能容纳大片段的外源DNA。如YAC(酵母人工染色体），BAC(细菌人工染色体），PAC(P

8、1来源的人工染色体），MAC（哺乳动物人工染色体）各种克隆载体的比较载体受体细胞结构插入大小适用pUC18/19质粒E.coli环形质粒<10kb亚克隆文库λ噬菌体E.coli线