研细胞培养第讲细胞生长条件和培养室建设

《研细胞培养第讲细胞生长条件和培养室建设》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第二章细胞培养的条件•营养•无菌无毒的培养环境•温度•无污染的操作环境•pH•无菌室•渗透压•O•恒温培养箱2•CO2•超净工作台第一节细胞的营养和影响细胞生长的因素第二节细胞培养室建设第一节细胞的营养和影响细胞生长的因素一一、一、细胞的营养需要二二、二、影响细胞生长的因素一一、一、细胞的营养需要（（一（一一）一））氨基酸）氨基酸（（二（二二）二））碳水化合物）碳水化合物（（三（三三）三））维生素）维生素（（四（四四）四））无机盐）无机盐（（五（五五）五））微量元素）微量元素（（六（六六）六））脂

2、肪酸和脂类物质）脂肪酸和脂类物质（（七（七七）七））促生长因子）促生长因子氨基酸•合成蛋白质的原料，也是细胞重要的能量来源•种类及数量影响着细胞的密度、增殖、活力等诸多方面•几乎所有的细胞均需要12种必要的氨基酸：精氨酸、缬氨酸、酪氨酸、组氨酸、色氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、胱氨酸•添加一定量的非必需氨基酸能够减少细胞合成这些氨基酸的代谢负担•比如：谷氨酰胺对细胞培养非常重要，是细胞合成核酸和蛋白质必须具有的氨基酸。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡，肿瘤细胞培养时

3、，谷氨酰胺需求量比正常细胞高一倍。促生长因子（somatomedin，SM）•肽激素类：胰岛素、表皮生长因素（EGF）、成纤细胞生长因素（FGF）、血小板来源生长因子（PDGF）•皮质醇、甲状腺素（T）也属于促生长因子3•作用：促进细胞生长增殖，维持细胞的功能和分化状态•胰岛素：能促使细胞利用葡萄糖和氨基酸，促进有丝分裂作用•氢化可的松：对皮肤上皮细胞及乳腺上皮细胞增殖生长有促进作用，提高神经胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率•血清中含有多种促细胞生长的因子，是体外培养细胞所需生长因子的重要来源简简

4、简称简称称称名名名称名称称称来源及作用特点分分分子分子子子量量量量软骨生长因子来自牛软骨组织CDGF(catilagederived16,000～18,000促软骨细胞有丝分裂growthfactor)克隆刺激因子由多数组织间质细胞产生,但在血清中无。具有CSF(colonystimulationfactor)引起骨髓细胞生长及分化的双重功能表皮生长因子存在于小鼠颌下腺(mEGF)和人尿(hEGF)。通常6,045(mEGF)EGF(epidermalgrowthfactor)为促有丝分裂使用,但

5、有时可呈现抑制作用5,500(hEGF)内皮细胞生长因子EDGF(endothelialcell来自牛神经组织17,000～25000growthfactor)眼生长因子EDGF(eye-derivedgrowth来自牛网膜14,000～21000fadtor)成纤维细胞生长因子来自牛垂体(pFGF)和牛脑(bFGF)促有丝分裂作13,300(pFGF)FGF(fibroblastgrowthfactor)用13,000(bFGF)生长调节素C来自血清，亦可用PDGF或GH刺激人肝成纤维IGF-1

6、7,600(stomatomedinC)细胞而产生，促有丝分裂作用生长调节素AIGF-2似IGF-17,600(stomatomedinA)白细胞介素-1IL-1顺序与FGF相似，刺激IL-2产生并激活β细胞17,500(interleukin-1)白细胞介素-2由激活的T细胞与IFN-γ同时产生，刺激B细胞IL-217,500(interleukin-2)及巨噬细胞的生长和分化二二、二、、影响细胞生长的因素、影响细胞生长的因素（（一（一一）一））无毒无污染细胞培养环境）无毒无污染细胞培养环境（（

7、二（二二）二））恒定的生长温度）恒定的生长温度（（三（三三）三））合适的气体环境）合适的气体环境（（四（四四）四）pH缓冲系统（（五（五五）五））理想的渗透压）理想的渗透压（（六（六六）六））湿度和光）湿度和光（（七（七七）七））影响细胞生长的其他因素）影响细胞生长的其他因素（（一（一一）一））无毒无污染细胞培养环境）无毒无污染细胞培养环境•离体细胞缺乏防御能力，在有污染物和毒性物质的环境中生存可造成细胞生物学特性改变，甚至中毒死亡•生物、物理及化学因素都可能入培养环境造成污染。•来源：•（1）生

8、物性的污染，对细胞危害最大•（2）器材清洗消毒不彻底而带入有毒化学物质•（3）细胞自身代谢产生的多种有毒产物：酶、抗原、毒素等•（4）不同细胞类型的交叉污染也在增加。例如，目前世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染。预防：对不同细胞系或细胞株操作避免使用同一瓶培养液或试剂，不要交叉使用吸管营造无毒无污染的培养环境•（1）培养室的空气要彻底消毒•（2）实行严格无菌操作•（3）各种物品拿入操作台前应用洒精擦表面，用前于紫外线照•（4）操作者洗手、泡手，酒精擦手•（5）打开培养管、瓶