非酒精性脂肪性肝病大鼠血清瘦素浓度及肝脏瘦素受体表达的研究

《非酒精性脂肪性肝病大鼠血清瘦素浓度及肝脏瘦素受体表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要非酒精性脂肪性肝病大鼠血清瘦素浓度及肝脏瘦素受体表达的研究摘要目的:采用高脂饮食制备大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)模型，检测血清瘦素水平、肝组织瘦素受体的表达与肝组织病理变化的相关性，以阐明瘦素在NAFLD发病机制中的作用，为有效防治本病提供理论依据。方法:选用雄性健康Wistar大鼠40只，体重2009115g,正常饲养1周后，将大鼠随机分为正常对照组及高脂饮食组，每组20只。正常对照组给予标准饲料;高脂组在标准饲料基础上添加10%猪油、2%胆固醇。于第20周末将两组大鼠各20只全部断

2、头处死，取血5m1，以备血清学检查。观察肝脏的颜色、质地，快速称重，取肝右叶组织3块，分别用于快速冰冻切片，行SudanW染色，观察肝细胞脂变情况;10%甲醛固定用于HE染色及Masson三重染色，观察肝组织的炎症、脂肪变性及纤维化程度;4%多聚甲醛固定用于瘦素受体免疫组化染色，观察肝组织瘦素受体的表达。用日本OlympusAU2700全自动生化分析仪检测空腹血糖(fastingbloodglucose,FBG)、血清甘油三酷(triglyceride,TG)，比色法测定血清游离脂肪酸(freefatyacid,FFA)，严格按说明书进行操作。用放射免疫法测定空

3、腹血清胰岛素(fastinginsulin,FINS)水平，按HOMA模型计算空腹状态下胰岛素抵抗指数IRI=(FINSxFBG)/22.5。用ELISA法中文摘要测定血清瘦素(leptin,LP)浓度。HE染色观察肝组织普通病理变化;Masson三重染色观察肝组织纤维化的程度;SudanN染色观察肝细胞脂肪变的程度;采用SP法对肝组织标本进行瘦素受体免疫组化染色。炎症活动度积分标准分为汇管区炎症(P)、小叶内炎症(L)、碎屑样坏死(PN)、桥接坏死(BN)四项，每项根据病变程度分别计1-4分，将各种病理变化评分相加得到总积分，记分公式为P+L+2PN+2BN。

4、用多功能病理图象分析仪测定肝脂变、胶原纤维、瘦素受体表达面积百分比，每张切片选取四周及中央五个区域，20倍物镜下计算平均面密度(阳性面积与统计场面积百分比)，结果取平均值。使用SAS8.0统计软件处理实验数据，所有数据以无士S表示，两样本均数比较采用t检验，若P<0.05，则认为两组数据差异有显著性。直线相关及多元线性回归用于相关分析。结果:1大鼠一般表现:与对照组相比，高脂组大鼠体重及肝指数(肝重琳重)明显高于对照组(P<0.01)。第20周末，正常大鼠肝脏外观呈红褐色，明亮有光泽;高脂组大鼠肝脏颜色呈浅黄或土黄色，与周围组织有粘连，切面油腻感，无光泽。2血清

5、学指标的变化:与正常组相比，模型组大鼠血清瘦素(LP)、甘油三酷(TG)、游离脂肪酸(FFA)、胰岛素抵抗指数(HU)均显著升高(p<0.01)。3肝组织病理变化:高脂组大鼠肝细胞均出现中、重度大泡性脂肪变，SudanW染色可见脂变的肝细胞胞浆中有大块红色颗粒，肝组织内有不同程度炎症、纤维化。高脂组脂变、炎症、纤维化评分分别为40.57-+7.77,3.39-+0.87,4.10+0.55，对照组为一—一-一一--~一-~~-一-~~-~~2中文摘要1.16士0.25,0.6510.28,2.01士0.53。两者差异有显著性(P<0.01IP<0.01,p<0.

6、05)。正常组大鼠肝组织免疫组化染色可见瘦素受体主要表达在肝细胞膜上，表达瘦素受体的部位呈棕黄色，瘦素受体相对含量为39.4617.06。与正常组相比，模型组大鼠肝组织表达瘦素受体的肝细胞数明显减少，且颜色明显浅淡，瘦素受体相对含量为14.52土4.63。模型组肝组织瘦素受体表达的相对含量比对照组显著降低(p<0.01)。4相关性分析:模型组大鼠血清瘦素浓度与肝细胞脂变评分、炎症活动度评分呈显著正相关，r=0.80(p<0.01)，:=0.68(p<0.01);与纤维化程度评分无明显相关，r二0.24(p>0.05).模型组大鼠肝组织瘦素受体表达量与血清瘦素浓度

7、、血清游离脂肪酸、胰岛素抵抗指数、肝细胞脂变、炎症活动度呈显著负相关，相关系数分别为r=-0.83(p<0.01)，:=-0.71(p<0.01)，r=-0.65(p<0.01)，r=-0.83(p<0.01)，r=-0.87(p<0.01);瘦素受体表达与肝组织纤维化评分无显著相关，r=-0.32(p>0.05)。采用多元逐步回归分析法以肝脂变(Y)为应变量，以瘦素受体表达(X,)、血清瘦素浓度(从)、血游离脂肪酸(X3),胰岛素抵抗指数(X4)为自变量建立回归方程，在a=0.05水准进入方程的只有瘦素受体表达这一变量，回归方程为:Y=60.78一1.39X,

8、，确定系数:R2=0.6