PPARγ配体对白血病K562细胞的生长抑制作用及其对TLRs表达的影响研究

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1、中山大学硕士学位论文PPAR?配体对白血病K562细胞的生长抑制作用及其对TLRs表达的影响研究专业名称：内科学申请人：胡婷指导老师：刘加军副教授中文摘要过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisomeproliferators．activatedreceptor,PPAR)丫是一类由配体激活的转录因子，属于核激素受体超家族成员。激活的PPARy与核内的维甲酸X受体结合形成异源二聚体，再与靶基因的启动子中PPAR反应元件相结合，调节靶基因的转录。PPAR7主要调控脂质代谢和脂肪细胞分化，也参与糖类代

2、谢、细胞周期调节、炎症反应、动脉粥样硬化、细胞凋亡等病理生理过程。研究报道PPAR7激动剂对多种肿瘤细胞具有抑制细胞生长和诱导细胞凋亡作用，早期研究显示在许多血液细胞中可检测到PPARy的表达，而且在人髓系和淋系白血病细胞中也可检测到PPAR?的表达。尽管大量资料显示PPAR7激动剂具有潜在的抗肿瘤作用，但具体作用机制尚不十分清楚。最初认为PPAR7激动剂是通过调节PPAR7介导的靶基因的表达来抑制肿瘤细胞增殖。然而近年来有研究表明，在一些肿瘤中PPARy激动剂是通过P呐非依赖途径发挥抗肿瘤作用。T

3、oll样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)是天然免疫反应中抵抗病原微生物入侵机体的第一道防线。至今已发现哺乳动物中TLRs家族有11个成员。每个TLR都可识别不同的病原相关分子模式(pathogenassociatedmolecularpatterns，PAMPs)。当病原体入侵机体后TLR特异性识别PAMP，通过髓样分化蛋白88、IL．1受体相关激酶、肿瘤坏死因子受体相关因子6等各种转接分子介导的信号转中山大学硕士学位论文导途径发挥生物学效应。TLR2、4可分布于各种肿瘤细胞，

4、参与肿瘤免疫监视，并对肿瘤的生长发挥作用。最近研究报道TLR2、4可以通过NF．KB途径调节干细胞的增殖与细胞凋亡。但TLR2、4在K562细胞中的表达尚未见资料报道。研究目的观察PPAR7激动剂罗格列酮(RGZ)联合拮抗剂GW9662对人慢性髓系白血病K562细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响以及对PPAR7和TLR2、4表达的调节作用，探讨PPAR7途径在RGZ诱导K562细胞凋亡和生长抑制机制中的作用，并试图揭示TLR信号通路在PPAR7非依赖途径中的作用。方法本研究采用人慢性髓系白血病K562细

5、胞株为靶细胞，实验分四组：409mol／LRGZ组、lO“mol／LGW9662组、联合用药组(40pmol／LRGZ+101．tmol／LGW9662)、对照组(未加药)。1分别用不同浓度的ROZ(20．80pmoFL)、0W9662(1，101．tmol／L)、40pmol／LRGZ联合GW9662(1，10pmol／L)处理细胞24、48及72小时后，采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞生长抑制作用。2运用瑞氏一姬姆萨染色法油镜下观察各组48小时后细胞形态学改变。3采用AnnexinV／PI

6、双染流式细胞仪分别测定各组24、48、72小时的细胞凋亡率。4PI染色流式细胞仪分析各组72小时后对细胞周期的影响。5RT-PCR法检测对照组PPAR7和TLR2、4表达水平，以及各给药组24、48、72小时对P呐mRNA表达的影响。。6采用直接免疫荧光法流式细胞仪检测各组48小时后对TLR2、4蛋白表达的影响。7SPSSl3．0软件进行数据统计处理，采用单因素方差分析，以P<0．05为统计学显著性意义标准。lI中山大学硕士学位论文结果lMTT结果显示：401．tmol／L以上的RGZ组较对照组呈时

7、间、剂量性抑制K562细胞的生长(P

8、凋亡的改变。3FCM检测细胞凋亡结果显示：409rnol／LRGZ组和109moFLGW9662组较对照组差异有统计学意义(P<0．05)；401．tmol／LRGZ联合109moFLGW9662诱导K562细胞凋亡呈现时间依赖性，于72h时细胞凋亡率达50％以上，高于两种药物单用时的凋亡率。4FCM检测细胞周期结果显示：401．tmol／LRGZ组和10tttmoFLGW9662组较对照组G0／GI期细胞的比例增高同时S期细胞比例降低，差异有统计学意义(P