《物证检验》PPT课件

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1、DNA分析技术在法医物证学上的应用复旦大学上海医学院法医系李莉法医物证学内容亲权关系鉴定个体识别亲权关系鉴定亲权纠纷（离婚案）移民案强奸致孕案拐卖丢失儿童案（医院中）婴儿错抱案（计划生育中）超生与否的鉴定个体识别凶杀案强奸案碎尸案石蜡包埋组织块调错案法医物证学鉴定方法血清学方法检验红细胞血型、白细胞血型、红细胞酶型、血清型DNA检验技术DNA指纹技术、PCR扩增技术血清学方法的局限性检材需要量大，且对时限要求较高（HLA分型要求采血后16--24小时内必须检验）不适用于陈旧、微量检材鉴别能力有限，不宜用于同一认定只能否

2、定DNA检验DNA核DNA线粒体DNA基因组DNA:核DNA与线粒体DNANucleusMitochondria基因组稳定的体系人类基因组是一个十分稳定的体系：不同的民族、群体和个体都有46条染色体有相同数目的基因有基本相同的核苷酸序列正是基因组结构的这种稳定性保证了人类作为一个物种的共同性和稳定性。基因组变异的体系人类基因组又是一个变异的体系。在长期进化的过程中，基因组的DNA序列不断地发生变异。这些变异可能是有害的、有益的或中性的。其中一些变异得以遗传，导致了不同种族、群体和个体间基因组的差异或多态性。除了同卵双生

3、子外，没有两个个体的基因组完全相同。人类基因组计划的成果HGP：1990-2000年（中国参与了其中1%的测序工作）解读了人类24条染色体上的30亿对碱基（3×109bp），绘制了人基因组草图。人基因组DNA：<5%为基因编码序列,>95%为非编码序列基因数量:8-10万不同个体间99.9%DNA序列完全相同0.1%DNA序列上的不同决定了个体间表型差异DNA序列变异中的90%表现为单核苷酸多态性（SNP）单倍型图谱计划HapMap计划：找出约50万个标签SNPs，提供与1000万个SNPs大致相同的图谱信息。HapM

4、ap计划:由日本、英国、加拿大、中国、尼日利亚和美国的科学家们合作完成。2002年10月正式启动,历时三年。2003年，中国承担了“HapMap计划”10%的任务。HapMap“中国卷”的具体内容:构建人3号、21号染色体和8号染色体短臂的HapMap;提供一半的亚洲样品。法医学DNA检测技术的发展第一代：VNTR（小卫星）检测（DNA指纹技术）第二代：STR（微卫星）检测、线粒体DNA检测（PCR技术）第三代：SNP（单核苷酸多态性）检测第一代：VNTR（小卫星）检测（DNA指纹技术，RFLP）（20世纪80年代）R

5、FLP技术DNA指纹技术的发明者----Jeffreys,遗传学家,1985年DNA指纹DNA纹印DNA指纹使用一个含有多拷贝数核心序列的多基因座DNA探针（如33.6探针或33.15探针），在低强度条件下（较低温度、较高盐浓度）同时与许多VNTR基因座（约1000个）杂交，经电泳显示其中50-100个基因座的杂交结果，获得由一系列DNA片段谱带组成的图像，称DNA指纹。可进行同一认定DNA纹印使用基因座特异性探针，在高强度条件下（较高温度、较低盐浓度）与特定的基因座进行杂交，获得DNA纹印。杂合子显示2条谱带，纯合子

6、显示1条谱带。DNA纹印特异性强，4-6个单基因座探针可达到同一认定的目的。操作流程限制酶操作流程限制酶DNA指纹技术应用的实例DNA应用于亲权鉴定的第一个案例----用DNA指纹技术进行一例移民案件的亲权鉴定，使得一名13岁的英国男孩得以回国与母亲团聚。第二代：STR（微卫星）检测（PCR技术）线粒体DNA检测（PCR+测序）20世纪90年代：在法医生物学方面，开始运用PCR技术检测VNTR、STR、mtDNA标志，用于个体识别和亲权鉴定。PolymeraseChainReaction1985年，由Cetus公司的M

7、ullis博士发明NobelPrize-1993Dr.KaryMullis,wasawardedaNobelPrizeforhisworkin1993.DNA检测方法比较RFLP信息量大费时（1~2周）费力>50ngDNADNA不能降解PCR快速省力<1ngDNA适用于降解DNA复合扩增检测自动化mtDNA结构D-loopD-环区（displacementloop)HV1HV2在线粒体DNA基因组中占5-7%长约1100bpHV1:29-408bpHV2:15996-16401bpmtDNA测序DNA抽提；利用两对引

8、物，分别对HVⅠ、HVⅡ进行PCR扩增；PCR产物纯化；利用HVⅠ的L链引物和HVⅡ的L链引物，分别对HVⅠ、HVⅡ的单链进行PCR扩增（dNTP带有四色荧光标记）；乙醇沉淀DNA；在测序仪上进行毛细管电泳，判读序列；与Anderson标准序列进行比对，找出变异点。母系遗传mtDNA毛发骨骼牙齿俄沙皇NicholasII墓穴中的骨