威灵仙总皂苷的分离纯化及对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞体外作用的实验研究

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1、威灵仙总皂苷的分离纯化及对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞体外作用的实验研究摘要目的g制备纯化的威灵仙总皂苷，体外作用于急性早幼粒细胞白血病NB4细胞，研究威灵仙总皂苷对NB4细胞的作用机制，为临床用药提供理论依据。方法：(1)运用大孔吸附树脂对威灵仙提取液进行分离纯化，得到威灵仙总皂苷，并对其含量进行检测。(2)设置多个浓度梯度的威灵仙总皂苷药物组，观察用药后不同时间点的NB4活细胞数，计算生长抑制率；Wright's．Giemsa染色计数法和NBT还原试验测定细胞分化率，透射电镜观察细胞形态学变化；流式细胞术检测CDI1b／CD33表达情况，AnnexinV法测定细胞凋亡率。结果：(1

2、)使用大孔树脂法纯化威灵仙总皂苷，精密性试验和重现性试验的RSD分别为0．85％和1．35％：威灵仙总皂苷主要富集于70％乙醇洗脱液部分，总皂苷含量达23．14=1--0．12％，其回收率达到4．55％，其RSD为0．89％。(2)威灵仙总皂苷对NB4细胞有明显的生长抑制作用，且具有剂量．效应依赖关系；在本实验条件下，威灵仙总皂苷对NB4细胞无明显的诱导分化作用，但成熟粒细胞比例随浓度增高有所升高：能显著诱导NB4细胞凋亡，诱导凋亡率与时间具有依赖性，在25I．tg／ml一100ttg／ml范围内具有浓度依赖性。结论：(1)使用大孔吸附树脂可以有效提纯威灵仙浸液中的有效成分总皂苷：(2)

3、威灵仙总皂苷可有效抑制NB4细胞增殖，诱导其发生凋亡，但具有统计学意义的诱导分化现象不明显。关键词：威灵仙；总皂苷：急性早幼粒细胞白血病；NB4细胞株；细胞分化；细胞凋亡StudyonthePurificationofTotalSaponinfromClematischinensisOsbeckandtheEffectsonAcutePromyelocyticLeukemiaNB4CellLineinvitroAbstract：Objective：StudyonthepurificationoftotalSaponinfromClematischinensisOsbeckandtheef

4、fectsonAcutePromyelocyticLeukemiaNB4celllineinvitrotOprovidetheoryevidenceforclinicalapplication．Methods：(1)ToestablishamethodfortheseparationandpurificationoftotalsaponinfromRadixClematidisbymacroporousabsorptiveresinanddetectthecontentoftheextraction．(2)TheNB4cellswereindependentlytreatedwithAT

5、RAandtotalsaponincombinedwithdiffererntconcentrationsinfivedays．TheproliferativeinhibitionratesofNB4cellinducedbytotalsaponinandATRAwerecalculatedineveryday．CelldifferentiationsweredemonstratedbyGiemsastain、transmissionelectronmicroscope(TEM)andNBTreductionassayatdifferenttime．TheexpressionsofCD1

6、lbandCD33andapoptosisratesinducedbythesedrugsweremeasuredbyflowcytometry(FCM)atdifferenttime．Thecellapoptosisrateindlmedbythesedrugsweremeasuredbyflowcytometry(FCM)．Results：(1)TheRSDsofprecisiontesting，andreproducibilitytestinginpurificationsoftotalsaponinfromClematisusingmacroporousresin，wereO．8

7、5％and1．35％respectively．TotalsaponinsofRadixClematidiswereenrichedinthe70％ethanolelutedsolutionfraction，andobtainedwithayieldrateof23．14+0．12％，andtherecoveryratereached4．55％withtheRSDofO．89％．(2)ClematisTotalSaponinsonNB