利用唐鱼卵黄蛋白原监测食品中雌激素类似物研究

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1、摘要摘要利用唐鱼卵黄蛋白原监测食品中雌激素类似物研究专业：申请人：导师：动物学宋丹马广智。雌激素类似物“(EstrogenMimicS，OestrogensChemicals)又称环境雌激素(environmentalestrogen)对野生动物的毒害效应已引起了人们的广泛关注，但食品中存在的雌激素问题尚未引起足够的重视。本研究的目的是利用鱼类卵黄蛋白原(vitellogenin，Vtg)作为生物标志物，探索监测食品中环境雌激素方法。首先建立鉴定唐鱼(Tanichthvsalbonubes)Vtg方法。以性成熟雌性唐鱼为实验材料，取鱼整体和卵巢分

2、别进行匀浆离心，取上清液进行聚丙烯酞胺凝胶电泳(native-polyacrylamidegelelectrophoresis，Native-PAGE)，然后通过考马斯亮蓝R一250染色、Sehiff试剂进行糖蛋白染色、甲基绿试剂进行磷蛋白染色、苏丹黑B试剂进行脂蛋白染色等四种染色确认唐鱼Vtg的存在及其鉴定特征。在已经建立鉴定唐鱼Vtg方法的基础上进行17B．雌二醇(17p．estradiol，E2)诱导雄性唐鱼产生Vtg实验。以性成熟雄性唐鱼为实验材料，将不同浓度E2混在唐鱼的基础饲料中投喂一个月，取雄性唐鱼进行整体匀浆、离心和电泳，然后染色

3、鉴定。实验表明，未经E2诱导的雄性唐鱼没有产生Vtg，经E2诱导的雄性唐鱼产生Vtg。最后将经过E2诱导的雄性唐鱼作为阳性对照，未加任何摘要处理的雄性唐鱼作为阴性对照，测试保健食品(美媛春121服液、蜂胶、蜂王浆等)的萃取液投喂雄性唐鱼1个月能否诱导唐鱼产生Vtg。结果表明，0．1、l、lOpgE2／kg饲料投喂均能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg；110支美嫒春口服液萃取物／kg饲料投喂能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg，而11支美嫒春口服液萃取物／kg饲料和1．1支美嫒春121服液萃取物／kg饲料不能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg；300粒蜂胶萃取物／kg饲

4、料投喂能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg，而30粒和3粒蜂胶萃取物／lkg饲料不能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg；30ml和300ml蜂王浆萃取物／1kg饲料投喂能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg，而3ml蜂王浆萃取物／1kg饲料投喂不能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg；2g、20g和2009黄豆萃取物／kg饲料投喂均没能诱导雄性唐鱼体内产生Vtg。本论文为为建立食品中环境雌激素监测分析的方法奠定基础。关键词：雌激素类似物唐鱼卵黄蛋白原Native．PAGEⅡAbstractTheStudiesofUsingVitellogeninofZalbonubestoABST

5、RACTMonitortheEnvironmentalEstrogenMimicsinFoodMajor：Z00109YName：DanSongSupervisor：GuangzhiMaRecently，theharmtowildlifebyEstrogenMimicsisinthehottopicinenvironmentalresearch，however，theharmbytheenvironmentalestrogeninthefoodhasnotbeenpayedenoughattention．TheaimOfthisstudyisto

6、exploretheway0fmonitoringtheenvironmentalestrogeninthefoodswiththevitellogeninasabiomarker．Thefirststepwastoestablishthemethod0fevaluatingthevitellogenininTanichthvsalbonubes．TogetthewholebodyandtheovaryOfmaturefemaleTa疗ichthvsalbonubestohomogenate，centrifuge，respectively．Ana

7、lyzingtheclearSOlutionbynative-polyacrylamidegelelectrophoresis(Native．PAGE)．ThenthevitellogenindidexistornotcouldbeprovedbyCoomassieBrilliantBlueR一250，stainingofthegelforcharbohydratewithSchiffreagent，stainingofthegelforlipidwithmethylgreen，stainingofthegelforphosphruswithSu

8、danblackB，eta1．ToinducethevitellogenininmaleTanichthvsalbonubPJwith1