《实验认知》PPT课件

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1、实验一生化实验认知一、实验室简介二、实验室常用仪器使用三、实验室安全防护四、生化实验考核办法五、清点器材一、实验室简介生化实验室为上海交大生农医药大平台生物化学实验室，目前承担生命科学与技术学院、医学院、药学院、农业与生物技术学院等学院本科生生物化学实验教学任务，实验教学时数达3.5万人学时数。生化本实验室拥有凝胶成像分析系统、蛋白质表达、纯化和鉴定系统、紫外分析仪、PCR仪、恒温培养箱、超声波细胞粉碎机、高速台式离心机、低温冰箱、超净工作台、超纯水机等，可同时容纳90名学生参加实验。实验室现有人员4人、其中教授1人、副教授2人、实验室专职人员1人。1.务必于規

2、定時间內到达实验室。2.务必穿实验衣。3.严禁在实验室吃东西4.离开实验室时，务必将所有物品归位，桌面保持干净。5.废液请倒入收集桶内。本实验室需要提醒学生的实验室规则：二、实验室常用仪器使用1、离心机2、分光光度计3、计量仪器1、离心机在实验过程中，欲使沉淀与母液分开，有过滤和离心两种方法。在下述情况下，使用离心方法较为合适。a.沉淀有粘性；b.沉淀颗粒小，容易透过滤纸；c.沉淀量多而疏散；d.沉淀量少，需要定量测定；e.母液量很少，分离时应减少损失；f.沉淀和母液必须迅速分离开；g.母液粘稠；h.一般胶体溶液；使用方法1）使用前应先检查变速旋钮是否在“O”处

3、。2）离心时先将待离心的物质转移到大小合适的离心管内，盛量占管的2/3体积，以免溢出。将此离心管放入外套管内。3）将一对外套管（连同离心管）放在台秤上平衡，如不平衡，可用小吸管调整离心管内容物的量或向离心管与外套间加入平衡用水。每次离心操作，都必须严格遵守平衡要求，否则将会损坏离心机部件，甚至造成严重事故，应十分警惕。4）将以上两个平衡好的套管，按对称位置放到离心机中，盖严离心机盖，并把不用的离心套管取出。5）开动时，先开电门，然后慢慢拨动变速旋钮，使速度逐渐加快。停止时，先将旋钮拨到“O”，不继续使用时，拔下插头。待离心机自动停止后，才能打开离心机盖并取出样品

4、，绝对不能用手阻止离心机转动。6）用完后，将套管中的橡皮垫洗净，保管好。冲洗外套管，倒立放置使其干燥。2、分光光度计分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计的简单原理分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。使用方法1）用波长设置键，设置所需的分析波长。2）将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，

5、盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第一个槽位中。仪器所附的比色皿，其透射比是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不能有气泡、悬浮物，否则也将影响样品测试的精度。3）将参比样品推（拉）入光路中，按<100%T>键调100%T，此时显示器显示的“BLA——”直至显示“100.0”为止。4）当仪器显示器显示出“100.0”后，将被测样品推（拉）入光路，这时便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链D

6、NA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。光度计测量的转换:双链DNA(dsDNA)：A260=OD260=1相当于50µg/ml溶液单链DNA(ssDNA)：A260=OD260=1相当于33µg/ml溶液RNA：A260=OD260=1相当于40µg/ml溶液测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯

7、净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。蛋白质的直接定量（UV法）这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。注意事项为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求A280吸光值至少大于0.

8、1A，吸光值最好在0.1