国际上牛胚胎移植及胚胎工程

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1、国际上牛胚胎移植及胚胎工程应用现状桑润滋河北农业大学动科院（071001）笔者于2002年6月20日—7月8日和2004年3月19日—4月7日分别陪同省长钮茂生、省委书记白克明率领的河北省经贸代表团两次赴澳、新、韩三国访问。2004年4月—7月先后接待了澳大利亚SPB的总经理刘永树先生、法国Salers（萨来尔）牛协会主席和阿根廷胚移专家CarlosMunar（卡罗斯·莫纳）到河北的来访，就牛胚胎移植相关问题进行了交流，现将上述几个国家有关牛胚胎移植应用情况归纳如下：一、体内胚胎生产（超数排卵）

2、与胚胎移植情况（一）阿根廷莫纳胚胎移植公司1．超排方法：0天放入第一个CIDR+肌注P4（50mg）+肌注BE（2mg）；第7天撤掉第1个CIDR，放入第2个CIDR+肌注P4（50mg）+肌注BE（2mg）；第11天注FSH，早，晚各1次；第12天注FSH，早，晚各1次；第13天注FSH，早，晚各1次；第14天注FSH，早，晚各1次，并且早晨撤掉第2个CIDR，早，晚各注PG1次；第15天早注FSH1次；第16天—17天发情，AI；第23—24天采胚2．胚胎移植规模他们用上述方法每年超排牛40

3、00—5000头，头均获可用胚胎6枚左右，最高1头获69枚胚胎。法国Salers牛，每年胚移10000头以上，鲜胚妊娠率70%左右。主要用于选种。表1阿根廷莫纳胚胎移植公司用体内胚胎鲜胚移植结果受体发情天数移植头数受胎头数移植成功率（%）6.034221362.36.571045163.57.01502104369.47.51937134669.58.0135294169.68.534825071.8合计6191424068.5本结果为卡罗斯、莫纳在墨西哥1994年移植结果。胚胎为超排7天采得的

4、桑椹胚和早期囊胚。其中,桑椹胚移植成功率为66.6%,早期囊胚为72.09%。二、用屠宰场母牛卵巢卵母细胞体外生产胚胎据新西兰的海青兰讲，他们和新西兰皇家农科院合作，每周可生产胚胎1000枚，每年生产5万枚左右。三、澳大利亚SPB采用活体采卵（OPU）、体外受精（IVF）和胚胎移植（ET）对牛进行集中繁殖通过使用活体采卵（超声导向和阴道探头（TVR））、体外受精、胚胎移植三项技术对成熟供体进行胚胎生产和移植。SPB采用OPU—IVF—ET对牛进行集中繁殖生产主要包括以下八个步骤：1、健康检查，2

5、、供体牛选择，3、卵子收集，4、体外受精和胚胎生产，5、受体牛选择与同情发情处理，6、胚胎的移植，7、妊娠诊断，8、接产与产犊。SPB公司采用活体采卵每年生产1万枚胚胎左右。第一步健康检查供体母牛必须身体健康，生殖系统良好，先前做过MOET的母牛或具有生殖疾病的母牛被列为“劣质牛”，因为这样的母牛不能高效而准确地生产胚胎。先前做过MOET的母牛可能由于操作或激素的原因造成粘连或卵巢囊肿、卵巢静止等。第二步供体牛选择1、适宜活体采卵母牛的生理时期（1）14月龄以上发情周期正常的青年牛和成年母牛。（

6、2）分娩后恢复发情周期的泌乳母牛，且未在产乳高峰期的母牛。（3）干奶期的母牛。SPB（南太平洋生物技术有限公司）认为，干奶期的母牛是最好的供体选择。（4）人工授精后3—4周未出现返情的母牛或怀孕3个月以上的母牛。供体牛群供体牛群第三步卵子收集1、活体采卵基本方法（1）先将母牛麻醉，并且使母牛保持站立姿势。（2）将超声波探头插入阴道，探头会将信号传输到荧屏幕上，从而在荧幕上出现卵巢和卵泡的形态与位置，这种阴道探头有一个19G的细针，该细针通过硅管与真空泵相连，细针可以直接插入卵泡，将卵子吸入到收集

7、管中。2、活体采卵间隔时间及水平。母牛每周采卵1-2次。可间隔3-4天进行连续的采卵，对于正常母牛，无须进行激素刺激；但是当母牛采卵数少于7个时，可用外源激素进行适当调节。通常的做法是每14天做一次外源激素刺激；每收集一次卵子，可培养发育1.5-2.0个A、B级胚胎，这样一周采集2次，可获3.0-4.0个优质胚胎。SPB每年每头牛可获胚胎约160枚。3、影响活体采卵的因素及采卵效率。（1）对于有过生殖疾病的母牛或做过MOET的母牛，即使现在它们的生殖系统健康，不能期望高于平均值；（2）老年母牛采

8、卵数少，并且质量很差；（3）泌乳期的母牛，尤其在泌乳高峰期，采卵数会很低；（4）营养状况十分重要，母牛处于能量与营养平衡时会生产更多、更优的胚胎，但母牛不能过于肥胖。专门的活体采卵人员可以在6个小时采集25头左右。第四步体外受精与胚胎生产1、精液品质鉴定：用于体外受精的精液要进行品质鉴定。先用提前鉴定的公牛精液与从屠宰场收集的卵子进行实验。用这种方法来判断精液是否可以成功受精，是否可以产生优良胚胎。这一步非常重要，因为人工授精良好的公牛精液不一定在体外受精时也表现良好。通常，一个人工授精剂量的精