《高效液相色谱》PPT课件

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1、《仪器分析》课程Chapter14HighPerformanceLiquidChromatography第十四章高效液相色谱法14.1概述高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法一、HPLC与经典LC区别二、HPLC与GC差别三、特点14.1.1HPLC与经典LC区别主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段1．经典LC：仅做为一种分离手段柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm且不均匀常压输送流动相柱效低（H↑，n↓）分析周期长无法在线检测2．HPLC：分离和分析柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱）高压输送流动相柱效高（H↓

2、，n↑）分析时间大大缩短可以在线检测14.1.2HPLC与GC差别相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测主要差别：分析对象的差别和流动相的差别1．分析对象GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品不可检测占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%续前2．流动相差别GC：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用HPLC：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分

3、离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相可以增大分离选择性3．操作条件差别GC：加温操作HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）续前14.1.3HPLC的特点和应用“三高”“一快”“一广”高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC）高灵敏度高选择性分析速度快应用范围广泛（可分析80%有机化合物）14.2高效液相色谱仪1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置14.2.1流程图1.贮液瓶贮液瓶用于存

4、放溶剂。溶剂必须很纯，对溶剂呈惰性，采用耐腐蚀的玻璃瓶或聚四氟乙烯瓶。贮液瓶应配有溶剂过滤器，以防止流动相中的颗泵内。溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金小一般为2μm。贮液瓶要耐腐蚀，粒进入制成，空隙大为了防止流动相从色谱柱内流出时压力降低，释放出气泡进入检测器而使噪声剧增，要求贮液瓶中的溶剂在使用前先进行脱气。常用的脱气方法有低压脱气法、吹氦气脱气法、加热回流法及超声波脱气法等。2.高压泵由于液体的粘度比气体大102倍，而且固定相的颗粒极细，对流动相有很高阻力，为保证一定的流速，必须借助高压迫使流动相通过柱子。高压泵应具备以下特点：⑴耐高压（40～50MPa·cm-2）、耐腐蚀、密封性好；

5、⑵脉动小，送液量稳定，流量范围广(0.1～10mL·min-1)；⑶适于进行梯度洗脱；⑷泵腔的体积小，便于快速更换溶剂。泵的柱塞向前运动，液体输出，流向色谱柱；向后运动，将贮液器中的液体吸入缸体。如此前后往复运动，将流动相源源不断地输送到色谱柱中。将两个柱塞往复泵串联，可达到无脉动溶剂输出。分为恒压泵和恒流泵多用柱塞往复泵柱塞往复泵3.梯度洗脱装置梯度洗脱是流动相中含有两种或两种以上不同溶剂，在洗脱过程中连续或间断改变流动相的组成，使强烈滞留的组分不容易残留在柱上，因而可保持柱的性能良好。HPLC有等梯度洗脱和梯度洗脱两种洗脱方式：前者保持流动相组成配比不变，后者则在洗脱过程中连续或阶段

6、的改变流动相组成，它需要配有梯度淋洗装置。梯度淋洗低压梯度高压梯度外梯度，特点是先混合后加压内梯度，特点是先加压后混合4.进样系统1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室）GC系统压力较小，可以HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期）2）阀进样：不必停泵，六通阀(a)准备状态(b)进样状态进样器的阀体使用不锈钢材料，旋转密封部分由坚硬的合金陶瓷材料制成，既耐磨、密封性能又好。由于进样可由样品定量环的体积严格控制，因此进样准确，重复性好，适于作定量分析，更换不同体积的样品定量环，可调整进样量。5.色谱柱直径4~5mm,柱长10~25cm。柱效高、选择性好、分析速度快。柱效评价：柱再生：维护

7、、保养、柱子的冲洗1）紫外检测器（UVD）：适于吸收紫外光的物质样品组分通过流通池时对特定波长紫外线的吸收，引起透过光强度的变化，而获得浓度—时间曲线。样品浓度与吸光度的关系服从朗伯—比耳定律。最低检出浓度可达10-10g·mL-1；2）荧光检测器（FD）：只能分析自身发光的物质最小检测浓度可达0.1ng·mL-1；3）示差折光检测器（RID）：利用折光率的差别，灵敏度低，分析高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等。检测限可达10-6~10