人类免疫缺陷病毒(i型)hiv-rna核酸定量检测sop

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1、.人类免疫缺陷病毒（I型）核酸定量检测系统标准操作程序1.目的：规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒（HIV-IRNA）的检测过程，确保检测结果的准确性和重复性。2.检测方法和原理2.1检测方法：TaqMan探针荧光定量PCR法。2.2检测原理：人类免疫缺陷病毒（I型）核算定量检测试剂盒（PCR-荧光法）采用核酸扩增技术，定量检测人血浆中HIV-IRNA。该方法包括三个主要步骤：（1）样品制备以分离HIV-IRNA；（2）靶RNA的逆转录形成互补DNA（cDNA）；（3）靶（cDNA）的PCR扩增

2、以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。3.标本要求3.1标本类型：血浆（EDTA抗凝）。3.2标本的采集与处理3.2.1标本采集量：采集患者静脉血6mL（EDTA抗凝真空采血管）。3.2.2标本处理：标本采集后应在2小时内送至实验室，实验室收到标本后在1小时内处理标本。3.2.2.1签收：门诊、住院以及CDC标本签收条码，并做好相关登记工作。3.2.2.2编号：对标本进行唯一编号，内容如下：“年月日6位数字+标本号3位数字”，例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为：“1801

3、01401”。3.2.2.3离心：800-1600g,20min离心标本。3.2.2.4标本保存：血浆在室温（25-30℃）最多存储1天；2-8℃最多存储6天；-20℃—-80℃可存储6周。将待检血浆以2管每管1200uL量存储于2.0mL戴螺旋盖的无菌聚丙烯管，在管壁编写如3.2.2.2的编号。未检标本放置于专用样本盒中，冻存于-80℃冰箱。已检血浆置-80ºC冰箱保存2个月，到期后按科室有关程序作废弃标本处理。4.仪器和试剂4.2试剂：（配套封闭试剂）4.2.1试剂盒（包含核酸提取试剂、质控品及阳性定

4、量参考品组分、PCR检测试剂组分）保存于2-8℃环境下，有效期22个月。4.2.3试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过72小时；2-8℃条件下不超过30天。4.2.4主要组成成份：..组份名称规格数量质控品阴性质控品1000μL/管1临界阳性质控品1000μL/管1强阳性质控品1000μL/管1HIV2CS148测试1HIV2CS248测试1HIV2CS348测试1HIV2CS448测试15.标准操作5.1COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48的配置如下：配置实验所需的架子和耗材相应

5、位置COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48a.K-tubes放在样本架上b.带有K-tips的K-tip架c将带有样本或质控的S-tubes放在样本架上d.带有SPUs的SPU-架e.CS1放在一个试剂架f.CS2,CS3,CS4放在一个试剂架g.将空的K-carrier放在K-carrier架上样本核酸提取完成后：K-carrier上的K-tubes手工转移F-HM-PF-HJ-LAB-EM-P(M-P)6.2.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48上使用试剂及耗材的

6、保存及注意事项：1).所有试剂（HIV-Itest试剂）2-8℃保存，即拿即用；2).试剂启用后，可保存28days(2-8℃)；3).试剂启用后，在CobasAmpliprep上累计使用时间最多64hrs；4).CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、H(+)强阳性质控，使用后的废弃；5).洗液2-30℃保存，打开后可使用28days；6).耗材（S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU）常温保存。6.3.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48上使用样本的保存及注意事

7、项：..1).需要的样本为血浆；2).血样在2～25℃下运输，24hrs内(HIVRNA)收集出血浆(室温800-1600g离心20分钟)；3).HIVRNA检测：血浆可在室温下(25-30℃)保存最多1天，在2～8℃最多保存6天，或者-20~-80℃下长期保存，至少6周；4).血浆建议倒取1100-1200μL进行保存；5).血浆冷冻时，最多冻融5次不损失HIVRNA。6.4.COBASAmpliPrep_COBASTaqMan48HBVDNA定量检测操作流程：A仪器初始化及维护A1打开COBASAmp

8、liPrep和COBASTaqMan开关，等待仪器初始化完成，为stand-by状态A2登陆电脑及AMPLILINK软件登陆Windows®XP操作系统（UserID和password）a)双击桌面上AMPLILINK软件图标b)登陆AMPLILINK软件（UserID和password）A3通过软件Status界面检查洗液量是否足够，如不够需要更换新的洗液A4检查软件维护界面Due按钮下列出的需要进行的维护内容，按照维护手册