红花黄色素对Tau蛋白过度磷酸化所致阿尔兹海默症的保护作用研究

《红花黄色素对Tau蛋白过度磷酸化所致阿尔兹海默症的保护作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R961学号：201500370017硕士学位论文红花黄色素对Tau蛋白过度磷酸化所致阿尔兹海默症的保护作用研究ProtectiveEffectsofSafflorYellowonAlzheimer’sDiseaseInducedbyTauPhosphorylationInVitro研究生姓名：郝雪言指导教师：马成俊（教授）学科门类：工科专业名称：生物化工论文提交日期：2018年4月1日摘要红花为菊科植物红花（CarthamustinctoriusL.）的干燥管状花，是我国传统中药。现代药理研究表明，红花中的水溶性红花黄色素是红花的主要有效成分，主要

2、包括羟基红花黄色素A（HydroxysaffloryellowA,HSYA）、红花黄色素A（SaffloweryellowA,SYA）、红花黄色素B（SaffloweryellowB,SYB）。本研究以红花药材为材料，制备红花黄色素中的SYB纯品；体外培养人神经母细胞细胞SH-SY5Y细胞，建立阿尔兹海默病（Alzheimer’sDisease,AD）体外细胞模型，探究HSYA、SYA、SYB对冈田酸致成熟分化的SH-SY5Y细胞突触损伤、Tau蛋白异常磷酸化的保护作用及机制，为研究红花黄色素的神经保护作用提供了新思路，为其临床应用提供实验依据。主要研究内容

3、和结果如下：（1）红花药材醇沉除杂后，浓缩液经AB-8大孔树脂吸附洗脱后得到SYB粗品，最后经过葡聚糖凝胶（SephadexLH-20）柱层析法制备SYB纯品，其纯度达到98%以上。（2）建立冈田酸致分化成熟神经元突触萎缩及Tau蛋白异常磷酸化的体外AD细胞模型。通过观察细胞形态变化、测量并计算突触与胞体的比值、Westernblot检测Tau蛋白Ser-262位点磷酸化水平等实验，发现SH-SY5Y细胞经5μmol/LATRA诱导4天后，与正常细胞相比，诱导后的细胞突触明显增长（P＜0.01）,同时细胞周期停滞于G0/G1期，细胞表现出典型的分化神经元特征

4、。不同浓度（0、10、20、30、40nmol/L）的冈田酸处理分化成熟的神经元不同时间（3、6、9、12、18h），细胞突触萎缩、形态变化明显；40nmol/L冈田酸处理细胞，随时间的推移细胞突触萎缩明显，Tau蛋白Ser-262位点磷酸化先升高后降低。最终确定AD体外细胞模型的建立条件为：5μmol/LATRA诱导SH-SY5Y细胞4天，使其分化为成熟神经元；40nmol/L冈田酸处理6h，可引起分化成熟神经元突触萎缩、Tau蛋白异常磷酸化。（3）0.2-1μmol/L的HSYA、SYA、SYB分别与40nmol/L冈田酸同时作用于分化成熟神经元6h，吉

5、姆萨染色观察细胞形态、Westernblot检测Tau蛋白Ser-262位点磷酸化水平。HSYA、SYA、SYB三种红花黄色素能够明显改善冈田酸所致分化成熟神经元突触萎缩、使细胞铺展良好、形态上趋于正常细胞，降低Tau蛋白在Ser262位点的磷酸化水平，三个化合物均可浓度依赖性抑制Tau蛋白过度磷酸化。I（4）采用流式细胞术通过荧光探针检测细胞内活性氧、线粒体膜电位、线粒体源活性氧和线粒体数量的变化，采用ATP含量检测试剂盒检测胞内ATP含量变化，对线粒体功能进行评价。三种红花黄色素可以抑制冈田酸所致的细胞内活性氧水平的升高、线粒体活性氧的产生、线粒体膜电位

6、的降低、线粒体数量的增多及ATP合成的降低。红花黄色素能够改善冈田酸所致分化神经元的突触损伤、减轻Tau蛋白Ser-262位点异常磷酸化，其机制可能与线粒体功能有关。关键词：红花黄色素；阿尔兹海默病；SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞；Tau蛋白；氧化应激IIAbstractSafflower,adrytubularflowerofCarthamustinctoriusL.isatraditionalChinesemedicine.Modernpharmacologicalstudieshavereportedthatthewater-solublesaffl

7、oweryellowpigementsincludinghydroxysaffloryellowA(HSYA),SaffloweryellowA(SYA)andSaffloweryellowB(SYB)arethemaineffectivecomponentsofsafflower.Inthisstudy,SYBwaspurifiedfromsaffloweryellowpigments;Humanneuroblastocytes(SH-SY5Y)cellswereculturedtomodeltheAlzheimer’sDisease(AD)invitro

8、.Toinvestigatetheprotectiv