拟南芥IQM1互作蛋白的筛选与初步鉴定

《拟南芥IQM1互作蛋白的筛选与初步鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号学校代码：11078UDC密级学号：2111514016广州大学学位论文拟南芥IQM1互作蛋白的筛选与初步鉴定罗慧婷学科专业（领域）：遗传学研究方向：植物重要基因功能的研究与利用论文答辩日期：2018-5-25指导教师（签名）：答辩委员会主席（签名）：答辩委员会委员（签名）：SortCodeUniversityCode：11078UDCSecretGradeNumber：2111514016GuangzhouUniversityMasterDissertationScreeningandPreliminaryIdentificati

2、onofInteractingProteinswithIQM1inArabidopsisLuoHuitingSubjectMajor：GeneticsDirectionofStudy：FunctionalStudyandutilizationonImportantPlantGenesAnswerDate：Supervisor(Signature)：AnswerCommitteeChairman(Signature)：AnswerCommitteeCommitteeman(Signature)：广州大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交

3、的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日广州大学学位论文版权使用授权书本人授权广州大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权广州大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印﹑缩印或扫描等复制手段保存﹑汇编学位论文。（保密的学位

4、论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日摘要摘要AtIQM1由At4g33050编码。本课题组的前期研究表明，IQM1编码一个Ca2+不依赖的钙调素结合蛋白（calmodulin-bindingprotein,CaMBP），介导CaM、光和部分非生物胁迫信号的转导，参与气孔防卫和根生长发育的调节。本文拟通过分析植物中IQM1的蛋白量、IQM1互作蛋白的酵母双杂交筛选、双分子荧光互补实验验证以及CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建互作蛋白基因突变体等方法，进一步研究IQM1在拟南芥中的分子机能，结果

5、如下：1.通过IQM1半定量RT-PCR分析，转基因植株P35S:HA-IQM1的IQM1基因的表达量远远高于野生型Col，但在蛋白表达量分析中，P35S:HA-IQM1的WesternBlot显影结果显示为无条带。2.构建诱饵蛋白表达载体pGBKT7-IQM1，与拟南芥幼苗cDNA文库AD质粒共转化酵母AH109株系，经过初筛、复筛、测序得到了15个候选互作蛋白，构建这15个基因的pGADT7载体，并分别与pGBKT7-IQM1质粒共转化酵母AGB109株系，一对一进行酵母双杂交互作验证，初步确定编码蛋白At5g51570、转录因子TC

6、P21及LSU1能与IQM1蛋白在酵母体内互作。3.构建TCP21和LSU1基因的双分子荧光互补载体，制备野生型Col叶片的原生质体，利用质粒共转化原生质体，并在激光共聚焦显微镜中观察、拍照。结果显示pSAT1-nEYFP-IQM1与pSAT1-cYFP-TCP21、pSAT1-cYFP-IQM1与pSAT1-nEYFP-TCP21、pSAT1-nEYFP-IQM1与pSAT1-cYFP-LSU13个组合以及pSAT1-cYFP-IQM1与pSAT1-nEYFP-LSU1组合在原生质体中都能发出荧光。这说明IQM1与TCP21以及LSU1

7、在植物细胞中存在相互作用。4.利用CRISPR/Cas9技术，构建了IQM1互作蛋白与TCP21和LSU1的基因组编辑载体，为了后续研究IQM1与TCP21和LSU1的遗传关系奠定了材料基础。关键词：IQM1；钙调素；互作蛋白；拟南芥IAbstractAbstractAtIQM1isencodedbyAt4g33050.OurproviousresearchesshowedthatIQM1encodesanovelCa2+-independentcalmodulin-bindingprotein(CaMBP)whichmediatesth

8、esignaltransductionofCaM,light,andsomeabioticstresstoregulatestomatadefense,rootgrowthandrootdev