叶绿体色素的提取分离及其理化性质

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1、叶绿体色素的提取分离及其理化性质的观察2012.3一.实验目的因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在生产中有着广泛的应用。1.学习叶绿体色素的提取方法。2.了解叶绿素和类胡萝卜素的一些主要理化性质。绿色植物的光合作用是在叶绿体色素参与下进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。植物色素包括：①  脂溶性的叶绿体色素：存在于叶绿体，与光合作用有关，如叶绿素、类胡萝卜素等；②  水溶性的细胞液色素：存在于液泡中，与花朵的颜色有关，如花青素属黄酮类物质。二、原理与操作步骤（二）叶绿体色素的提取原理和方法各种植物叶绿体

2、中所含的色素有数十种，可分三大类。叶绿素类、类胡萝卜素类和藻色素类（或称藻胆素类）。后一类只存在于藻类。以下只介绍前两类。(一).实验材料：菠菜叶片。叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b，酯类化合物）和黄色素（包括胡萝卜素（烃类）叶黄素（衍生的醇类））两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。提取的操作步骤：乙醇提取液：（1）取菠菜叶片洗净、擦干、剪碎、混匀，称2g，放入研钵中。（2）加入少量石英砂及碳酸钙粉，加1～2滴管95%乙醇，研磨至糊状；再加10～15ml95%乙醇，提取1～3

3、min，过滤于三角瓶中；残渣用5ml95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。提取的操作步骤：水研磨匀桨：另取2g剪碎的新鲜叶片，放入少量石英砂（不加碳酸钙粉），用水研磨。先加2ml蒸馏水，研至糊状，再加蒸馏水20ml，搅均，不过滤。为做光破坏准备的乙醇提取液操作步骤：水研磨匀浆操作步骤：因吸附剂（本试验为滤纸）对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。1.提取液中各成分分离：用色层分析的原理加以分离分配系数吸附脱吸附再吸附再脱吸附叶绿体色素的结构决

4、定极性不同，因而在滤纸上的迁移速率不同。叶绿体色素叶绿素类胡萝卜素叶绿素a叶绿素b胡萝卜素叶黄素叶绿素的化学结构细菌叶绿素a叶绿素a叶绿素b卟啉植醇叶绿醇烃类衍生的醇类吸附剂：滤纸推动剂：石油醚:丙酮:苯（10:2:1）步骤：（1）圆形定性滤纸1张（直径11cm），用细头的吸管在其中心戳一圆形小孔（直径约3mm）。（2）另取一张滤纸条（5cm×1.5cm），沿纸条长度方向涂色素，限制在0.5cm，风干后，重复涂抹数次。沿长度方向卷成纸捻。涂抹色素要适量，量多拖尾，量少色带看不清。涂抹色素的技巧方法：将色素放到一块平板玻璃上，涂抹纸片，这样涂抹的色带窄，分离效果好。（3

5、）纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，与滤纸平齐（勿凸出）。（4）康维皿放置培养皿内，康维皿中央小室中加满推动剂。（5）把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸捻下端浸入推动剂中。盖好培养皿(为什么？)。（6）推动剂到达滤纸边缘时，取出滤纸，风干。用铅笔标出各种色素的位置和名称。（7）剪下一部分附到实验报告中。注意：1、色素多涂抹几次，风干后再涂抹第二次。细，匀，直，浓。2、涂抹的色素要适量，量多易发生拖尾，量少色带看不清；3、纸捻卷紧；4、色素涂抹的宽度不要超过纸条的二分之一；5、中心孔要小而圆；平齐，勿突出；6、分离时一定要盖严，防止推动剂蒸发。颜色从外往内分

6、别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色。分别为：？实验结果：标出各种色素名称（1）.光对叶绿素的破坏作用叶绿素（a，b）的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。（提取出叶绿素后先做这一步）用15N研究燕麦叶片中色素的合成和分解发现，72小时全部更新一遍。2.叶绿体色素的理化性质光对叶绿素破坏的操作步骤：稀释时不用严格定量？稀释2-3倍，为什么要稀释？水提取液暗光乙醇提取液暗光注意：色素乙醇提取液的浓度太大，必须进行稀释才能做光破坏实验，稀释倍数视提取液的浓度确定，浓度不要过大，否则在短时间之内效果不明显。光下破坏

7、的时间不要过长，否则看不到效果。阴天可以适当延长，时刻观察。阴天和晚上上课的同学取滤纸一张，将两种液分别涂抹在滤纸上，带回去，放在光下处理。水研磨匀浆液乙醇提取液置于光下10分钟折叠剪开置于暗处（2）、荧光现象叶绿素的荧光:叶绿素酒精溶液在透射光下为翠绿色，在反射光下为棕红色。这红光就是叶绿素受光激发后发射的荧光。叶绿素酒精溶液的荧光强度较强，约达其吸收光的10％左右，而鲜叶的荧光强度较低，只占其吸收光的0.l～1％。当荧光出现后，立即中断光源，用灵敏的光学仪器还可在短时间内看到红色“余晖”，这是磷光。如果提取液的浓度较低，无法观察到荧光。叶绿素的荧