赤拟谷盗蛛毒素受体Latrophilin功能及信号传导分析

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1、Ｉｆ±”立ｉ仑ｔ戀赤拟谷盗蛛毒素受体ＬａｔｒｏｐｈｉＩｉｎ功能及信号传导分析．，－ｙ货祭：是知Ｉ數餐讀容努幾智兹麥＾念治％翁７讀變靡＿ｉ４＾诱遂鑛擁鑛讀钱Ｓ雜凉錢纏第議：＿＇＇：：：－■：：－■：：旁－．（■；ｒ－－？：＾／Ｖ｝研宄生：高姗姗指导教师：李斌教授培养单位：生命科学学院一级学科：＾＿＿＿＿二级学科：动＾完成时间：２０１８年３月１０日答辩时间：２０１８年５月１９日＞＊＇—，￣，＂＊＊。＊°＊？－，

2、Ｔ？？’朽Ｓｒ？产，、ｉ－＇广虡ｖｊ＾＇，＾＾５：气！Ｖ＾ｙ＼戈入？学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作和取得的研宄成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研宄所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。■？学位论文作者签名日期？抑：烏如＾叫学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的

3、知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容、，可以采用影印、复印等手段保存汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电子和。（保密论文在解密后遵守此规定纸质文档，允许论文被查阅和借阅）保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：柯保密期限为年。学位论文作者签名指导教师签名：曰期：曰期：仏：＞丨＾？摘要Ｇ蛋白偶联受体（ＧＰＣＲ）Ｌａｔｒｏｐｈｉｌｉｎ（ＬＰＨ）不仅涉及

4、人类与哺乳动物的多动症、精神分裂症及成瘾等精神疾病的发生，还涉及到对外源蛛毒素的信号传递及多种药物的敏感性。目前关于ＬＰＨ受体在昆虫中的功能和信号传导机制尚不清楚。本研究首先在２１种动物中对ＬＰＨ进行了系统进化分析，结果显示，／ｐ／ｚ是一，Ａ分别在、头索动物由个共同祖先基因衍化而来但是／ｐ脊椎动物、尾索动物和昆虫中发生了独立的进化。基因在脊椎动物中发生了复制，产生了３个拷贝切－２和；７鸟类、尾索动物、头索动物中也发生了基因复制事件只存在和线虫中有两个拷贝，分别对应于脊椎动物和

5、一一然而，／／２基因个拷贝ｐ在昆虫只有。这些物种的／／＾虽然起源与个共同祖先基因是却发生了复杂的分化，暗示其在这些物种中可能发生了功能分化。，但为了研宄ＬＰＨ在赤拟谷盗生长发育中的调控作用，我们克隆了其几／＾基因，／发现该基因在赤拟谷盗中存在３种选择性拼接形式冲ａ，Ｔｃ／ｐＭ和Ｔｃ／ｐ／ｉｃ。为一了进步研究赤拟谷盗中这３种剪接本的作用，我们分别敲减了三种剪接本特异区域及公共区域，结果显示，ｄｓ／／ｚ组不产卵，成虫翅异常比例约２４％ｐ，成虫性成熟时累计死亡率约一３０％；进步分析表明，

6、这些效应由转录本及化祕所引起。一且进步回交实验结果显示ｄｓ／；＾组会导致雌性卵巢萎缩，其萎缩比例约为６３％，进而影响赤拟谷盗的生殖。在ｍＲＮＡ水平上对的信号通路进行初步研宄，发现抑制化／２表达后可导致ｐ／ｃ，ｐｔｏ和／ｏｘｏ表达上调，进而影响ｃＡＭＰ／ＰＫＡ、ＰＬＣ／ＩＰ３及ＩＳＳ信号通路。这些信号通路会影响昆虫翼羽化后表皮细胞死亡、卵黄原前体蛋白Ｖｇ合成及寿命进而导致赤拟谷盗生长发育及生殖受到影响。推测可能是通过这些信号通路来影响赤拟谷盗的生长发育。有趣的是，使用１０ｍｇ／ｍ

7、Ｌ克百威（氨基甲酸酷类农药）和ｌｍｇ／ｍＬ敌敌畏（有机磷类农药）处理对照组和敲除组的晚期幼虫，７２ｈ后ｄｓ／ｐ／ｚ组的累计死亡７Ｈ７／率较对照组死亡率显著增加，７。研究结果显示抑制赤拟谷盗／表达可导致乙ｃ一／酰胆碱（ＡＣｈ）通路上的关键基因上调表达，７ｔ７沉下调表达；进步测定乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）及乙酰胆碱转移酶（ＣｈＡＴ）酶活，结果显示酶活水一通过调控ＡＣ平与ｍＲＮＡ水平变化致；推测ＴＨｐ／ｚ可以ｈ通路影响赤拟谷盗对克百威和敌敌畏的药物敏感性。为进一步研究ＬＰＨ受体在赤拟谷盗生

8、长发育、生殖和药物敏感过程的调控ＩＭ－机制，我们利用ＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ高通量测序的方法分析了其下游关联基因及通路。测序结果显示ＲＮＡｉ干扰组（ｄｓ／ｐ／ｚ）和对照组有２７４个差异表达基因，其中１７２个基因表达量上升，１０２个基因表达量下降４２。这些差异基因被分匹配到功能条目中，包括免疫系统，，应激反应，发育和生殖杀虫剂的代谢过程。有趣的是，敲除及／如抑制了Ｔ