电磁脉冲对BV-2细胞形态和分泌功能的影响及其机制探讨

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1、中堡董生些病杂志2012年3月第3o卷第3期ChinJIndHygOccupDis，Mar2012，V01．30，N0．3·论著·电磁脉冲对BV一2细胞形态和分泌功能的影响及其机制探讨杨龙龙周艳李海娟郭娟张琰君丁桂荣郭国祯【摘要】目的研究电磁脉冲(electromagneticpulse，EMP)对小鼠Bv一2小胶质细胞形态及分泌功能的影响，并初步探讨其作用机制。方法离体培养的BV．2细胞经200kv，mEMP辐照200次，分别在辐照后1、6、12、24h收集细胞培养上清及细胞。倒置显微镜下观察细胞形态变化，ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子一cdTNF一)、白细胞介素

2、(IL)．1p、IL．10等细胞因子水平的变化，硝酸还原酶法检测培养上清中一氧化氮(NO)水平，DCFH．DA探针检测活性氧，免疫印迹(Western．blot)法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、c．Jun氨基末端激酶(JNK)、p38磷酸化水平和蛋白表达量的变化。应用p38抑制剂(SB203580)预处理细胞后再进行EMP辐照，然后检测培养上清中NO水平和活性氧的生成。结果EMP辐照后1、6和12h，部分小胶质细胞出现胞体变大、突触变粗变短，且活化细胞比例与假辐照组相比明显增加，差异有统计学意义(P<0．05)；EMP辐照后细胞培养上清中TNF．ot、IL．1B、IL一

3、10等细胞因子水平未发生明显改变，但活性氧检测结果显示，与假辐照组(小胶质细胞平均荧光强度10．34)相比，EMP辐照后1h小胶质细胞荧光强度(平均荧光强度21．56)明显增加，6h达峰值(平均值为32．46)，12h开始恢复(平均荧光强度24．36)，差异均有统计学意义(P<0．05)，24h恢复至假辐照水平；EMP辐照后NO水平的变化与活性氧一致，辐照后1h开始增加，6h达峰值，12h开始恢复，24h恢复至假辐照组水平；蛋白杂交结果显示，EMP辐照后1、6h，p38的磷酸化水平和蛋白水平较假辐照组明显增加，差异有统计学意义(P<0．05)，ERK和JNK无明显变化。应用

4、p38抑制剂SB203580预处理细胞，明显抑制了EMP诱导的小胶质细胞对活性氧和NO的产生，活性氧水平除6h组未恢复至假辐照水平外，其他各组均恢复至假辐照水平，NO水平各组均恢复至假辐照组水平。结论EMP辐照可活化小胶质细胞并且促进其对NO和活性氧的生成，p38信号通路参与了此过程。【关键词】电磁场；神经胶质细胞；活性氧组分；一氧化氮；有丝分裂素激活蛋白激酶类EfectsofelectromagneticpulseexposureonthemorphologicalchangeandexcretionfunctionofBV-2cellsandpossiblemechan

5、ismYANGLong-long,zHoUYah,LIHai-juan,GUoJuan,ZHANGYan-jun,DlNGGui—rong,GU0Guo-zhen．DepartmentofRadiationMedicineCollegeofheventiveMedicineFourthMn讧azwMedicalUniversit％Xi∞b710032,ChinaCorrespondingauthor：GUOGuo-zhen(E-mail：guozhen@fmmu．edu．cn)D1NGGui—rong(E—mail：dingzhao@fm—mu．edu．ca)【Abstra

6、ct】ObjectiveTostudytheeffectsofelectromagneticpulse(EMP)exposureonthemorpho·logica1changeandexcretionfunctionsofmousemicroglia(BV．2)cellsandpossiblemechanism．MethodsBV-2cellsweredividedintotwogroups：thegroupexposedtoEMPat200kV／mfor200pulsesandshamexposuregroup．At1．6．12and24hourafterexposur

7、ethecellsandculturesupernatantwerecollected．Cellularmorpho．1ogicalchangewasobservedunderinvertmicroscope，thelevelsofTNF—o【，IL．1BandIL一10inculturesuper．natantweredeterminedbyenzyme—linkedimmunosorbentassay(EUSA)，nitricoxide(NO)andreactiveoxy—genspecies(ROS)were