实验1光学显微镜的使用及显微绘

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1、细胞生物学实验12021/10/16光学显微镜的使用及显微绘图细胞膜的渗透性观察液泡系的超活染色与观察Feulgen反应制作细胞DNA定性、定量测定样品减数分裂的观察植物染色体标本的制备动物染色体标本的制备考马斯亮蓝染色显示细胞骨架细胞凝集反应及细胞吞噬细胞融合染色体分带技术实验1光学显微镜的使用及显微绘图22021/10/16一、目的要求（1）熟悉显微镜的结构和各部件性能。（2）掌握低倍镜/高倍镜的正确使用方法，掌握油镜的使用方法。（3）掌握显微绘图的基本方法（4）了解细胞的基本结构，动物、植物和微生物细胞的基本共性和特性32021/10/16二、仪器设

2、备及材料1.光学显微镜/显微照相系统（带油浸物镜）2.目镜测微尺及镜台测微尺3.香柏油、二甲苯4.永久装片、擦镜纸42021/10/16普通生物显微镜52021/10/16显微照相系统62021/10/16三、显微镜的构造1．机械部分支持和调节光学系统Charge-coupledDevice72021/10/16三、显微镜的构造2．光学系统82021/10/16三、显微镜的构造3．显微镜的能力显微镜的能力是质量和性能的标志。能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中最重要的是分辨率。R：分辨率（分辨的两个点的最短距离），R值愈小，分辨率越大。λ：照明

3、光线的波长(可见光平均波长约550nm）。N.A.：物镜的镜口率n：物镜和被检物体之间介质的折射率α：物镜的镜口角（从物镜光轴上的物点所发出的光线与物镜前透镜有效直径边缘所张的角度）。92021/10/16表1在550nm光波下不同物镜的分辨距离放大倍数（×）1040100镜口率（N.A.）0.280.651.25分辨距离（d）1μm0.42μm0.22μm102021/10/16科勒照明优点：视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。1893年德国杰出的学者AugustKohler提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之间，加放一光源聚光镜

4、和视场光阑，光源聚光镜把光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的孔径光阑平面处。同时，聚光器又使视场光阑成像在样品平面处。由此充分地利用了照明光源，使点状的光源达到较大的照明，从而使样品得到均匀的照明，并防止了高温。这对显微摄影和镜检观察至关重要。112021/10/16四、油镜的原理油镜（油浸系物镜，通常有黑圈或Oil的标志），以香柏油或石蜡油为介质。这类油的折射率与玻璃的折射率大致相同。光线从被检物体直接射入物镜，其间因折射或反射而引起的光线损失很小，所以可以充分利用镜口角，显著提高物镜的分辨率。油镜（镜口率一般在1.25左右）的分辨率在0.2m左右，这就

5、是光学显微镜的分辨极限。表1几种物质的折射率介质空气水石蜡油香柏油加拿大树胶光学玻璃折射率（n）1.0031.331.471.5151.5151.54122021/10/16五、显微镜的使用方法使用显微镜的要领就是从低倍物镜开始观察，先粗调后细调。在低倍物镜下找到要观察的东西后，再逐步加大物镜倍数，仔细观察。132021/10/16低倍镜的使用（1）检查：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。（2）准备：将显微镜放于前方略偏左侧以便观察。打开电源开关，观察底座的光路中是否有光亮。慢慢调节同一旋钮，光线应逐步增强。转动粗调节钮，将载物台下降使物镜

6、与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低倍镜4X对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒”声）。（3）放标本片：标本片标签面向上，用标本夹夹好，把要观察的部分移到通光孔的正中央。（4）调节焦距：边从目镜中观察，边调节粗聚焦旋钮，使载物台缓慢上升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调节钮，使物像更加清晰。（5）换10X物镜观察。此时，只须稍稍调节细调节旋钮即可。142021/10/162021/10/1615低倍镜的使用如果按上述操作步骤仍看不到物像时，可能由以下原因造成：①转动调节钮太快，超过焦点。应按上述步骤重新调节焦距。②物镜没有对正，应对正

7、后再观察。③标本没有放到视野内，应移动标本片寻找观察对象。④光线太强，尤其观察比较透明的标本片或没有染色的标本时，易出现这种现象，应将光线调暗一些后，再观察。162021/10/16低倍镜的使用高倍镜的使用如按上述操作仍看不到物像时，可能由下列原因造成：①观察的部分不在视野内，应在低倍镜下寻找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。②标本片放反了，应把标本片放正之后，再按上述步骤操作。③焦距没调好，应仔细调节焦距。如需要更换标本片时，应该先把载物台下降，然后把标本片移到载物台前方，再取下。（1）依照低倍镜操作步骤，先用低倍镜找到清晰物像。（2）将需要观察的部分

8、移到视野的中央。（3）眼睛从侧面注视物镜，用手移动转