常用电泳技术和电泳方法简介

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1、常用电泳技术和电泳方法简介济宁市中医院设备科科室业务学习一、常用电泳技术和电泳方法（一）根据工作原理的不同：可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦电泳、免疫电泳等。（二）根据有无固体支持物可分为：自由电泳和支持物电泳一、常用电泳技术分类（三）根据支持载体的位置或形状可分成：水平电泳、垂直电泳、板状电泳、柱状电泳、U型管电泳、倒V字形电泳、毛细管电泳等。（一）根据支持物的特点又可分为：①无阻滞支持物电泳。②高密度的凝胶电泳。一、常用电泳技术分类（二）根据电源控制的不同，一般可分为以下3类：1.恒压电泳;2.恒流电泳;3.恒功率电泳。（一）根据自动化程度的不同，可分为半自动和全自动型。一、常

2、用电泳技术分类（七）根据其功能的不同，可分为制备型、分析型、转移型、浓缩型等。（八）根据用法的类型可分为：双向电泳、交叉电泳、连续纸电泳、电泳－层析相结合技术等。（九）根据不同的使用目的可分为：核酸电泳、血清蛋白电泳、制备电泳、DNA测序电泳等。二、电泳方法简介（一）纸电泳指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间，样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后，再盖上绝缘密封罩，即可由电泳电源输入直流电压（100V～1000V）进行电泳。二、电泳方法简介（二）醋酸纤维素薄膜电泳电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的

3、分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。二、电泳方法简介（三）凝胶电泳由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式，被称为凝胶电泳。普通的凝胶电泳在板上进行，以凝胶作为介质（多孔性，类似分子筛的作用）。电泳中常用的凝胶为葡聚糖、交联聚丙烯酰胺和琼脂糖。它具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小(1～100μg）、分辨率高等优点。二、电泳方法简介（一）等电聚焦电泳1．等电聚焦电泳过程一种利用有pH值梯度的介质，分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH值梯度的凝

4、胶介质中，在电场内经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH值位置上，最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。二、电泳方法简介2．等电聚焦电泳的特点①使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择；⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。二、电泳方法简介（二）等速电泳采用两种不同浓度的电解质组成，一种为前导电解质，充满整个毛细管柱；另一种为尾随电解质，置于一端的电泳槽中。

5、前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。二、电泳方法简介（一）双向凝胶电泳（二维电泳）第一向采用等电聚焦根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。二、电泳方法简介胶性PH9中电加解入质了溶双液PH3加上电场后建立稳定PH梯度蛋白质溶液加入，建立电场染色后，蛋白质因PI值不同，沿PH梯度

6、分离开第一向等电聚焦PI逐渐降低等电聚焦胶放在SDS－聚丙烯酰胺凝胶上第二向SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分子量逐渐降低06-07双向凝胶电泳示意图PI逐渐降低二、电泳方法简介（七）免疫电泳免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。三、常用电泳设备的基本结构（一）电泳电源（二）电泳槽（三）附加装置四、电泳仪的主要技术指标1．输出电压8．连续工作时间2．输出电流9．保护措施3．输出功率10．显示

7、方式4．电压稳定度11．定时方式5．电流稳定度12．电源电压6．功率稳定度13．电源频率7．输出组数14．功耗