NF基因表达产物在大鼠脑的分布

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1、—1L—jL·日IJ舌神经纤维瘤病(Neurofibromatosis，NF)是一种常染色体显性遗传性疾病发病率国外统计为1／3000，国内统计为1／2．5万，其中50％的患者是因遗传而发病，而另外50％则代表一种新的基因突变“1。由于NF可侵犯身体的各个系统，因此临床表现变化多种多样。1987年美国国立卫生研究院将NF分为两型：NFl和NF2。NFl又称yonRecklinghausen病或周围性神经纤维瘤病，大约90％的患者为此型。主要表现有咖啡色斑、周围性神经纤维瘤、眼虹膜结节即Lisch结节等。NF2又称双侧听神经纤维瘤病

2、或中枢性神经纤维瘤病，较罕见，临床上主要表现为以双侧听神经瘤为主的多种类型的肿瘤，如视神经胶质癯、脑膜癯、星状细胞瘤、神经纤维瘤等。近十年来，NF在分子遗传学研究方面取得了不少进展。NFl和NF2的基因已分别被鉴定和克隆，NFI和NF2基因分别位于第17号染色体长臂1区1带2亚带(17q11．2)和第22号染色体长臂l区2带(22q12)。由NFl基因编码的蛋白质为神经纤维素(Neurofibromin)，含2818个氨基酸残基，分子量约为327KD；由NF2基因编码的蛋白质为Merlin，含595个氨基酸残基，分子量约为66KD

3、，两者均存在于胞浆中“’。目前认为，神经纤维素和Merlin均参与了细胞的生长与分化，并在肿瘤的发生过程中起重要作用。神经纤维素的氨基酸顺序与哺乳类GTP酶活化蛋白(GTPaseactivatingprotein，GAP)家族相似，可加速GTP水解成GDP，从而将细胞原癌基因ras编码的蛋白质p21ras从活化型的三磷酸鸟苷(GTP)结合形式p21ras—GTP，转化为失活型的二磷酸鸟苷(6DP)结合形式p21ras—GBP，从而对ras起负性调节作用。1；Merlin则在细胞膜与细胞骨架的连6按中起调节作用，参与调节多种细胞活动

4、，如细胞形状改变、细胞运动、细胞分化、细胞与细胞之间的信息交换以及细胞内环境的平衡等“3。由NF基因突变所致的神经纤维素和Merlin蛋白失活均可影响细胞生长控制，细胞生长抑制消失从而导致肿瘤的发生。神经纤维瘤病目前尚无特异的治疗方法，临床主要集中在遗传咨询及对可治疗的并发症的早期发现和及时治疗。对于并发症的处理主要是对症治疗。传统的方法有放射疗法、外科疗法、化疗等。但这些疗法除了杀伤癌细胞外，还大量杀伤肿瘤周围的正常细胞，因此，神经纤维瘤的最终治疗方法应是基因治疗。基因治疗可通过选择性地递送遗传物质到靶肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞生长

5、或引起肿瘤细胞死亡，从而弓l起抗癌效应。研究表明，神经纤维瘤是由于正常的神经纤维素或Merlin含量不足造成的，通过增加神经纤维素或Merlin的表达即可抑制因各自基因的突变而导致的细胞增生，因此，引入正常NFI基因或NF2基因的等位基因可纠正有缺陷的细胞表型，从而达到治疗作用。但就目前来说，神经纤维瘤的基因治疗并非易事。尽管NF基因已被克隆和分离，其在肿瘤发生中的作用也越来越受到人们的重视，但其具体的抑瘤机制尚未能弄清楚，NF基因的功能尚需要做进～步的研究。而研究NF基因功能最首要的工作，就是要弄清楚NF基因的表达，尤其是在脑组

6、织中的表达。因此，非常有必要对脑组织中NF基因产物蛋白质的分布作全面系统的观察，以便为进一步研究NF基因的功能提供形态学基础。目前，国内尚未见有关NF基因表达研究的报告，国外对NF基因表达的研究虽然相对多一些，但大部分实验都是以培养细胞为材料进行的，雨对NF基因在成年动物脑组织内的表达尚缺乏系统的观察和报道。而j；i，从目前各种实验得到的结果来看，尚有许多地方不一致。Stemmer等”1报道，通过Western印迹实验，发现Merlin在培养的人神经元及星形胶质细胞中均有表达。而Histotsumatsu等41通过免疫组化实验，发

7、现在正常人脑组织，Mer]jn丰要表达于神经元中，大多数星形胶质细胞中Merlin的表达为阴性，只在培养的人胶质瘤星形胶质细胞中观察到有Merlin表达。这其中的差异可能是由于实验材料及方法不同而造成的。我们注意到，Merlin与ERM蛋白家族有高度同源性，有报道在采用培养组织检测ERM蛋白表达的时候，ERM蛋白家族在培养组织中的表达往往会出现一个

8、二增性调节现象”1，因此推测在培养条件下，Merlin的表达也极有可能上调。此外，在运用RT—PCR、Western印迹法、Northern印迹法等技术来检测NF基因的表达时，由于这些

9、技术方法在细胞定性方面所固有的缺陷，无法区分来自血管壁组织成分或其它组织成分的阳性反应信号，有可能造成～些本来无NF基因表达的组织出现假阳性现象，对实验结果会造成一定影响，而免疫组化技术在细胞定性方面则具有一定的技术优势和特点。有鉴于此，本实验主要