厚皮甜瓜未受精胚珠离体培养技术

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1、河北农业大学硕士学位论文厚皮甜瓜未受精胚珠离体培养技术姓名：韩丽华申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：陈贵林;王建设20040615摘要将乙烯抑制剂AgNO。首次应用于厚皮甜瓜离体雌核诱导，获得单倍体。对其胚囊发育途径做切片观察，发现胚囊内卵器继续分裂，形成胚状体，萌发形成单倍体植株。5月下旬，取开花前14h的厚皮甜瓜品系2839未授粉子房，采用剥胚珠的方法。将含有胚珠的三室胎座分开，接种于预培养基A上，35℃恒温箱中黑暗热激4天；而后在25℃光下，含有AgN03处理的诱导培养基B上诱导2周，AgN03浓度分别为0，5，10

2、，15，20，30，40，60，80，160mg．L～；将胚珠从胎座上剥离下来，转移到胚状体萌发和胚芽伸长培养基C上，结果得到6棵由胚状体萌发的再生植株，hgN03浓度为80mg．L。1时，出胚率达最高0．74％。再生植株经微繁和继代培养后，共得到12棵小苗。通过保卫细胞叶绿体计数法进行倍性鉴定，1棵为单倍体，l棵为三倍体，l棵为四倍体，其它为混倍体。对胚珠离体雌核发育的不同阶段进行切片观察，发现接种当天，胚囊处于接近成熟的阶段，已经形成了八核结构，两个极核尚未融合；热激4天时，胚囊内出现细胞质浓厚的细胞团；培养18天后，可观察

3、到胚囊内由卵器的发育而来的胚状体产生。8月份，采用剥胚珠法和切片法接种，在同样的培养条件下，未得到再生植株，这说明供体植株的生理状态，接种方式都影响离体雌核的发育。关键词甜瓜；雌核发育；单倍体；hgN03；子房培养Invitro舒咀。殍岫ofmelon(Cucun“sraeloL)fromtmpollinatedOV010SAuthor：HanLihuaMajor：OlericultureTutor：ChenGuflin，WangJianshe(CollegeofHorticulture，AgriculturalUniversi

4、tyofHebei,Baoding,China171001)TheinhibitorofethyleneAgNOjwasfirstusedoninvitrogynogenesisinmelon．Haploidwasobtained．Cytologicalanalysisonthegynogenesisshowedthateggapparatusinembryosacdevelopedintoembryoid．InlateMay，ovariesofmelon(CucumismeloLCV．2839)excised14hbefore

5、anthesiswerepeeledbyhandstomaketheovulesjustoutoftheovary．Longitudinallyslicedovariesweresurfacesterilized，inoculatedonpretreatmentmediumAunder35℃for4daysinthedark，thentransferredtOinductionmediumBsupplementedwithdifferentAgN03concentration0，5，10，15，20，30，40，60，80，16

6、0mg．L1fortwoweeksunder25。Cwitha16／8h(1ight／dark)photoperiod．Followingtheinductionperiod，theovuleswereremovedfromtheplacenta，transferredtoelongationandregenerationmediumC．Sixovulesdevelopedintoplantletsbydirectembryoids．，Resultsfromtheregenerationtestindicatedthat80mg

7、．L．L1AgN03wasfavouredtotheefficiencyofgynogenesis，thepercentageofembryosreaching0．74％．Bymicropropagationandsubculture，sixregenerantsweresubdividedinto12plantlets．Throughthenumberofchloroplastsinguardcellfortheploidylevelamongtheplantletssurvived，oneishaploid，oneistri

8、ploid，oneistetraploid，othersaremixoploid，Cytologicalobservationongynogenesisshowedthatat14hbeforeanthesis，theembryoSaCShaveformedth