液相色谱法检测配合饲料中维生素A含量

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1、检测分析TESTINGANDANALYSIS液相色谱法检测配合饲料中维生素A含量*刘成模王华朗杨曦黄智成（广东恒兴饲料实业股份有限公司）［中图分类号］S816.17［文献标识码］A［文章编号］1002-8358（2015）16-42-3摘要：建立了一种高效液相色谱检测配合饲料中维生多见。国标GB/T17817-2010《饲料中维生素A的素A（VA）含量的方法。该方法灵敏度高，检出限为0.065mg/测定高效液相色谱法》方法检测饲料中维生素Akg，定量限为0.22mg/kg，回收率在79.36%~94.44%之间，相就是采用高效液相色谱

2、法。本方法针对国标中无对标准偏差为4.23%，方法准确、灵敏、快速，达到实际检测法进行批处理样品的缺点进行改进，改进后的检样品的要求，适用于配合饲料中维生素A的检测。经优化测方法可提高工作效率，适合对大批量样品进行后，其试验条件：氢氧化锌添加量为10mL，皂化反应温度检测。60℃，反应时间4h；样品添加量2.00g。关键词：高效液相色谱；维生素A；配合饲料1材料与方法1.1仪器与试剂维生素A是一种脂溶性维生素，是一类具有视安捷伦1260Infinity高效液相色谱仪，台式高黄醇生物活性的物质统称。维生素A在动物生长、速冷冻离心机（德国

3、SIGMA），旋转蒸发仪（瑞士步繁殖及视觉功能和免疫方面具有重要的作用，同时琪），分析天平（感量0.0001g，德国赛多利斯），恒温它也参与脂肪代谢，被证实是水产动物生长繁殖过水浴锅（上海沪南科学仪器联营厂）。程中必需的营养素。由于其不稳定，通常将其转化标准品：维生素A乙酸酯（含量≥99.0%，为酯的形式。由于脂溶性维生素不能经尿排出，所Sigma-Aldrich公司，美国）。以摄入过量脂溶性维生素易引起中毒，导致动物代试剂：甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水谢障碍和生长受阻。因此，准确快速测定配合饲料为超纯水。中维生素A含量，对于

4、优化饲料配方、提高养殖效1.2色谱条件率具有十分重要的意义。A色谱柱：XTerraMSC18，4.6×150mm，5μm国内外有关维生素A检测方法主要有分光光[1][2][3-7]B进样量：20μL，柱温27℃，流速1.0mL/min度法、荧光法和液相色谱法。分光光度法的检C检测器：紫外检测器326nm测灵敏度较低，荧光法干扰比较多，而用高效液相1.3试样制备色谱法检测配合饲料中维生素A含量的方法尚不1.3.1皂化称取2g（精确至0.0001g）试样于150mL带盖作者简介：刘成模，助理工程师，研究方向为农产品检测。玻璃瓶中，加入50

5、mL抗坏血酸溶液（5g/L），使试样通讯作者：王华朗，高级畜牧师，研究方向为动物营养完全分散，浸湿，加10mL氢氧化钾溶液（500g/L），与饲料研究。混匀。充入氮气以隔绝空气，摇匀，置于60℃水浴上42TESTINGANDANALYSIS检测分析皂化4h。皂化后立即放入冰水中冷却。1.3.2提取向皂化液中加入50mL乙醚（不含过氧化物），漩涡振荡后，把液体倒入250mL分液漏斗中，剩下固体再分别用25mL乙醚提取两次，将液体倒入分液漏斗中，轻轻振摇分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。每次用约100mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH

6、试纸检验直至水层不显碱性（最初水洗轻图2实际饲料样品色谱图摇，逐次振摇强度可增加）。1.3.3浓缩2.2定量测定将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约10g）脱水后本试验采用单点比较法，按上述色谱条件将加入与旋转蒸发器配套的100mL鸡心瓶（已加入50mg/L的标准工作溶液进样20μL，得到色谱峰面100mgBHT）内，用约10mL乙醚冲洗分液漏斗及无积响应值，用外标法定量测定。水硫酸钠2次，并入鸡心瓶内，于55℃水浴中减压2.3检出限和定量限蒸馏并回收乙醚，待鸡心瓶中蒸干乙醚，残渣用在本实验条件下，按信噪比S/N=3为检出限10mL甲醇溶解

7、。取适量溶液过0.45μm滤膜，滤液（LOD），S/N=10为定量限（LOQ），求得配合饲料中用于高效液相色谱分析。维生素A检出限为0.065mg/kg，定量限为0.22mg/kg，满足配合饲料中维生素A测定的灵敏度要求。2结果与讨论2.4方法的回收率和精密度2.1色谱分离称取已知含量南美白对虾饲料2g，共6份，分称取维生素A乙酸酯标准品10.0mg于150mL别加入标准工作溶液200μL、400μL、1000μL，按带盖密封玻璃瓶中，按试样制备（1.3）皂化和提取，照上述方式检测其含量，进行回收率测定，平均回将乙醚提取液全部浓缩蒸发

8、至干，最后用50mL甲收率为88.10%，结果见表1。醇溶解。此时维生素A乙酸酯浓度为200mg/L。再表1南美白对虾饲料中维生素A回收率试验结果将上述200mg/L标准储备液用甲醇稀释至50mg/L添加浓度/（μg/g