卵巢癌细胞系A2780DDP顺铂耐药机制的初步探讨

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1、卵巢癌细胞系A2780／DDPJII页,B耐药机制的初步探讨摘要背景：研究卵巢癌顺铂耐药的机制，对提高卵巢癌的治疗效果有较高的临床价值。现有的肿瘤耐药理论还不能圆满地解释卵巢癌顺铂耐药现象。顺铂是一种与细胞DNA结合，诱导细胞凋亡的铂化合物，耐药的卵巢癌细胞最终表现为细胞凋亡的能力显著下降。本研究从顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡角度出发，探讨了顺铂作用耐药细胞凋亡的特点和可能影响耐药细胞凋亡的因素，最后从蛋白质组整体水平来把握这些变化，以期动态捕捉与顺铂耐药相关的蛋白质，突破既往研究模式，更深层次了解顺铂耐药发生机制。第一章：顺铂诱导卵巢癌耐药细胞系A2780／DDP凋亡的时间和剂量依从性目的：

2、探讨顺铂作用不同时间和剂量诱导敏感和耐药的卵巢癌细胞系发生凋亡的变化规律和线粒体凋亡途径相关蛋白的表达。方法：选择卵巢癌顺铂耐药细胞系A2780／DDP和敏感细胞系A2780为研究对象。在细胞培养基础上，运用MTT比色法、HE染色、原位标记法、常规免疫组化和蛋白印迹等方法，观察了顺铂不同剂量(5、lO、20、40Ⅲ)和作用不同时间(24、48、72hr)对A2780和A2780／DDP细胞凋亡的影响和此动态变化过程中半胱天冬氨酸蛋白酶～2(caspase一2)和一3(caspase一3)的表达。结果：顺铂对A2780和A2780／DDP细胞系凋亡的诱导呈时间和剂量依从性。细胞凋亡蛋白ca

3、spase一2和caspase一3的活化促进顺铂诱导的凋亡，其表达呈现出对顺铂作用时间和剂量的依从性。结论：1、在顺铂耐药机理中，药物在体内分布和代谢，对血药有效浓度的影响和细胞对药物排斥引起顺铂进入细胞存在一定的阻碍可能是降低顺铂敏感性的因素。2、Caspase一2和caspase-3蛋白活化延后和活性降低可能是影响耐药的A2780／DDP细胞凋亡的原因。关键词顺铂耐药，凋亡，caspase-2，caspase-3，人卵巢癌Ill第二章：雌激素影响卵巢癌细胞系A2780／DDP顺铂耐药的相关机制目的：研究雌激素对顺铂诱导卵巢癌细胞系A2780和A2780／DDP凋亡的影响。方法：运用细

4、胞培养、MTT、HE染色、原位标记法、流式细胞术和常规免疫组化等方法，采取雌激素预先作用卵巢癌A2780和A2780／DDP细胞16hr，随后与顺铂共同培养诱导凋亡的方式，动态地观察雌激素对顺铂诱导这两个细胞系凋亡的影响和此过程中细胞周期分布和p53蛋白表达的改变。结果：雌激素促进顺铂诱导的A2780和A2780／DDP细胞凋亡，引起细胞周期由G。到s期的转变，p53蛋白对雌激素作用无明显影响。结论：处于细胞周期顺铂不敏感期的卵巢癌细胞可能与其耐药有关，雌激素可增加耐药的A2780／DDP细胞顺铂敏感性。关键词顺铂耐药，雌激素，凋亡，细胞周期，人卵巢癌第三章：卵巢癌细胞系A2780／DD

5、P顺铂耐药的蛋白质组学研究目的：建立人卵巢癌细胞系A2780和顺铂耐药系A2780／DDP双向凝胶电泳图谱，建立不同剂量顺铂(5、20Pt)、顺铂作用不同时问(48、72h)培养下和雌激素(50州)协同顺铂(10眦)作用下的A2780和A2780／DDP双向凝胶电泳图谱，初步分析它们蛋白质表达情况。方法：双向凝胶电泳(2-DE)分离4种不同条件处理下卵巢癌细胞系A2780和A2780／DDP的细胞总蛋白，银染显色，Imagemaster图’像分析系统分析，从胶中选取部分分离较好的差异蛋白质点，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF)，P

6、eptident软件搜索数据库鉴定蛋白质。结果：获取了重复性和分辨率较好的4种不同条件处理下的卵巢癌细胞系A2780和A2780／DDP双向凝胶电泳图谱。质谱分析了20个蛋白质点，获取了20张肽质量指纹图谱。初步鉴定了6个可能与卵巢癌细胞系A2780／DDP顺铂耐药形成相关蛋白质：调节器识别因子蛋白2(Modulatorrecognitionfactorprotein2)、热休克蛋白90伴随蛋白激酶37(Hsp90CO—chaperoneCdc37)、内皮单核细胞活化子(Endothelial—monocyteactivating)和胞浆抗蛋白酶2(CytoplasmicantiDrot

7、einase2)等4个蛋白表达增高，同时激活素结合蛋白(Activin—bindingprotein)表达降低和富含半胱氨酸的蛋白61(Cysteine—richprotein61)表达缺失时可能有利于形成顺铂耐药。3个可能影响顺铂诱导卵巢癌凋亡的蛋白质：IFIT一2(Interferon—inducedproteinwithtetratricopeptiderepeats2)、ARI一2(Ariadne一2proteinhomol