常见致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立

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1、山东省医学科学院硕士学位论文常见致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立姓名：王殿强申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：谢立信20060401学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。学位论文知识产权权属声明本人在导师指导F所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属山东省医学科学院。山东省医学科学院享有以任何方式发表、复制、公丌阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或

2、与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山东省医学科学院。1／论文作者签名：二兰啦鲫一业立革垒!兰2006胼堙}研究乍毕竹沦立常见致病真菌性角膜炎小鼠模型的建立山东省眼科研究所研究生：王殿强导师：谢立信教授【摘要J目的真菌性角膜炎是一种严垂的敏直性跟瘸，发病宰呈明显上升趋势，占感染性眼病的比例逐年增大，近年我国多地区统计显示真苗性角膜炎已跃居感染性角膜疾病的首位．而临床上对真菌性角膜炎的处理颇为棘手，缺乏低毒、特异、有效的抗真菌药物，部分患者在药物治疗期间病情加重，即便手术治疗仍有少数患者最终丧失眼球，因此，近年来i幺病已引起眼科医生的关注。探索疾病治疗方

3、法首先是进行基础研究，而进行基础研究的基本途径就是建立杯准有效的动物模型，但是目前报道的多种方法存在缺少统一标准、感染率低、可重复性不高及依赖糖皮质激素等缺点．因此本研究探索一种新的方法：改良角膜表层镜法，在不应用糖皮质激素和免疫抑制剂的情况下，建立常见致病真菌性角膜炎小鼠模型，以便为进一步进行基础研究尤其是免疫学和分子遗传学发病机制做准备，同时观察菌丝在小鼠角膜基质内的生长方式等特点。方法选取3种临床常见的致病真菌：茄病镰刀菌、烟曲霉菌、白色念珠菌，近交系BALB／c小鼠，应用改良的角膜表层镜法，即刮除角膜上皮，大鼠角膜片覆盖其上，二者层问注入菌液，缝合眼睑。按菌

4、液浓度和闭台跟睑时间不同分组对比研究，拆除眼脸缝线后进行裂隙灯检查，临床评分，刮片、组织病理学检查及角膜组织定量培养．筛选最佳方法．结果(1)白色念珠菌组：菌液浓度1x1旷CFD／m1．闭合眼腧49h，小鼠角膜感染率100％，角膜溃疡重．持续时间长(>8天)，PAS染色见大量菌丝，菌丝生长方式总体上呈垂直生长趋势，浸澜角膜深基质层，甚至穿透角膜进入前房，角膜易穿孔，前房炎症反应重。真菌培养阳性，定量培养角膜内真菌数量随时问推移逐渐减少．(2)烟曲霉菌组：菌液浓度l×10SCFU／ml，闭合眼睑72h，小鼠角膜感染率83．3％，但轻重不等，持续时阃长短不一(4一S天)

5、，且发现溃疡呈全板层剥离现象，角膜缘新生血管增生早且迅速，溃疡自愈倾向明显，PAS染色见菌丝浸润角膜全层，生长方式总体上呈垂直生长趋势，真菌培养阳性。(3)茄病镶刀菌组：菌液浓度ixl0SCFI7佃J，闭合跟腧72h，小鼠角膜感染率91．7％，均为重度感染，持续时问长(>8天)，PAS染色见菌丝生长方式总体上呈垂直生长趋势，且易穿透角膜进入前房，甚至穿透晶体囊膜浸润晶体皮质。角膜组织定量培养真菌数量逐渐减织结构、宿主的防御能力及其与真菌毒力的相互抑制剂情况下，改良角膜表层镜法可以成功诱导白色念珠菌和茄病镶刀菌感染BALB／c小鼠角膜炎，可以用于真菌性角膜炎发病机理兕

6、其免疫学及分子尘物学等机制的研究；烟曲霉菌致BALB／c小鼠角膜感染窜十H对较低，自愈较迅速，可第2奥2006解倾ll!If究乍毕廿沦殳以扩大样本增加感染数麓用于早期发病机制研究。(2)三种真菌菌丝在BALB／e小鼠角膜摹质内，上长方式总体上均鬯垂直尘长趋势。(3)与以往．真苗性角膜炎兔模型研究对比发现，同一菌株<茄痫镰刀菌)在不刚物种宿差角膜内表现为不M的生长趋势，其原因可能与宿主角膜的组织结构、宿主的防御能力及其与真菌毒力的相互作用不同有关，具体机制尚需进一步实验研究。【关键词】真菌性角膜炎动物模型角膜表层镜法!E长方式第3Ca"2006朋坝I研究71-"毕牡论

7、文ExperimentalkeratomycosisofcommonlyencounteredpathogeniclungiinamousemodelShandongEyeInstitutePostgraduate：WangDianqiangAdvisor：ProfeSsorXieLixinIAbstractlPurposeToestablishamollsemodelofcornealthreecommonlyencounter甜pathogenicfungithatpermitstOstudythepathogenesisofnculomycosisespe