药筛实验方案

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1、方法一：1.化疗药物结合当前实际及常用化疗方案从中选用五种化疗药，四种一线药物长春瑞滨(NVP)、依托泊苷(VP-16)、长春新碱(VCR)、吉西他滨(GEM)以及一种二线药物多西他赛(TAX)。试验药物浓度即峰浓度(ug／mL)=(mg×平均体表面/平均体重)×(100／60)，其中mg为临床用药剂量(mg．kg-1．d-1)，国内大多数教科书介绍体表面积的计算公式是：SA=0.035W+0.1(W≤30)1.05+(W-30)×0.02(W>30)SA为人体表面积(m2)；W为体重(kg)；按照平均体重60kg计算，平均体表面积为1.6

2、5。化疗药物配制浓度及产地，见表1。2．实验方法种96孔板，分设加药孑L，阴性对照孔，空白孔，设3复孔。加药孔与阴性对照孔，每孔100uL细胞悬液，空白孔每孔100ul完全1640，最后每孔补加100ul完全1640，每孔终体积为200ul。在培养箱培养24h。加化疗药，加药孔加20ul化疗药，阴性对照孔加20ul完全1640，空白孔加20ul完全1640。将96孔培养板密封后继续放人培养箱中培养，观察48h。每孔加人5mg／mL的MTT20ul，继续培养4h。吸去上清后，每孔加入二甲基亚砜150ul，混匀，振荡培养板10min，使孔中沉淀

3、完全溶解。在酶联免疫检测仪上，以空白孔较0，以490nm为测量波长，690nm为参考波长，测每孔吸光度值(A值)。计算活性抑制率：活性抑制率=(阴性对照组A值-加药组A值)／阴性对照组A值×100％。当加药组血浆高峰浓度水平时的抑制率大于50％时，即为高敏，小于30％为耐药，介于两者之间为中敏。二、方法二1.　化疗药物:选用目前常用的化疗药物9种,用生理盐水配制(表1)。配好的实验药物-20℃保存,特殊药物另现行配制,应用时提前放置室温。三、方法三四、方法四