东北玉米自交系Bt基因遗传转化的研究

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1、东北农业大学硕士学位论文东北玉米自交系Bt基因遗传转化的研究姓名：侯艳华申请学位级别：硕士专业：植物学指导教师：徐仲2003.5.1摘要玉米是重要的粮食作物和饲料作物，也是现代食品工业、医药工业和化学工业的重要原料，所以它的遗传转化一直受到各国的普遍重视。由于农杆菌介导玉米遗传转化受到农杆菌宿主的限制和玉米自变系获得再生植株难的影响。使玉米自交系遗传转化体系仍不完善。本论文以东北地区骨干玉米自交系幼胚为外植体．采用农杆菌介导法将Bt基因导入了Mol7、吉846、81162及7922，并获得了PCR检测呈阳性的再生植株。实验中对玉米高效再生体系的建立和影响玉米遗传转化的

2、一些因素进行了优化．住要结果如下：飞1．玉米胚性愈伤组织的发生是受遗传因素控制的，不同基因型其胚性愈伤组织发生率及植株再生能力存在显著差异，其中以81162、吉846、7922、M017的胚性愈伤诱导频率较高，掖107、5416、444的诱导率较低，龙抗11、东农46最低。在影响胚性愈伤诱导的各因素中，2,4，D浓度直接影响愈伤组织的形态、生长和分化。总体来看，2mg／L的2,4．D最有利于胚性愈伤的发生，但不同基因型对2,4-D的敏感性不同，5416和M017幼胚的诱导需要3mg／L的2，4一D。2．经与农杆菌共培养后转化子的鉴定选用G418，在继代筛选培养基中添加

3、40mg／L，在分化筛选培养基中添加50mg／L；在除菌过程中，头孢噻肟钠、羧苄青霉素、氮苄青霉紊抑菌效果较好，掷菌时间较长。且这三种抗生素对玉米愈伤组织的继代和分化均无较大影响。但由于三者的使用浓度分别为：50mg／L、300mg／L、400mg／L，故选用50mg／L头孢噻肟钠作为除菌剂。3．影响遗传转化的因素主要探讨了预培养、菌液浓度和侵染时间、AS。其中预培养1、2、3天对转化率影响差异不显著：菌波浓度ODe,oo、侵染时间为5rain或10min时转化率较高；AS对转化率的影响较大，尤其是在共培养培养基中添加AS对转化率影响最大。4．转化后的愈伤组织经GUS

4、检测、石蜡切片检测证明Bt基因已经转入玉米愈伤组织。对抗性芽以及再生植株的PCR检测初步证明，Bt基因已整合进玉米基因组中。目前，已经获得转基因植株，对转化植株分子杂交正在进行中，为今后进一步将植物基因工程技术应用于玉米遗传改良打下了基础。’)豆一、／关键词：玉米，胚性愈伤≯根癌农杆菌；Bt基因i遗传转化，东北农业大学理学硬士学位论文StudyonthegenetiCtransformationofBtgeneintomaizeinbredlinesinNortheastMaizeWaSallimportantgraincropsandforagecrops，itwa

5、salsoamodemfoodindus时andanimportantnIWmaterialofmedicalandchemicalindosAry．soeachcountrypaledmoreattentiontoit’Sgenetictransformation，Owingtothecoflnementofthehostofagrobactrinmtumefliensandthedifficultiesofthemaizeinbredlinesforobtainingembryogeniccaili，thegeneticsystemofmaizeWash’tide

6、alenough．Inthisexperiment，theimmatureembryoswereused硒explanttoinducecalliandBtgenewastranferedintoM017、81162、Ji846and7922bytheAgrobactrium-mediated．WehavegainedthepositiveplantsdeterminedbyPCR．Meanwhile,themajorfactorsinfluencingtheregenerationsystemandtransformationsystemforagrobactedu

7、m-mediatedmethodwereoptimized．ThemainresultswereshowedasfolloMng：1．InductionofembryogeniccalliWasinheritable．Ditierentmaizegenotypesshoweddifferentabilityofemberyogeniccalliestabilishmentandplantregeneration．M017、Ji846、81162and7922hadthemosthi【gIIrateofinduction，Ye107、5416and44