吡哆胺对蛋白质非酶糖基化的干预作用

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1、原创性声明本人声明:所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体均已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体均己在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:莱场日期:1"3年略月;o日关于论文使用授权的说明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意学校及国家有关机构可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。论文作者签名:获场指导教师签名:刁具苦会日期:-100).4-,-

2、k日期:C2-3-0夕口官冲水大掌A反士，学位1仑大英文缩略词AG氨基肌AGES糖基化终产物AFU自定义荧光单位BSA-V牛血清白蛋白第五组分CMRPMI-1640培养液CMLN'-W甲基赖氨酸CP环磷酞胺DCC糖尿病慢性并发症DM糖尿病DMSO二甲亚讽EB澳化乙锭8-Glu6一葡萄糖酸内酉旨Hb血红蛋白HbA,,糖化血红蛋白LDL低密度脂蛋白LMA低熔点琼脂糖MGO甲基乙二醛Nat-EDTA乙二胺四乙酸二钠NEG非酶糖基化反应NF-xB核转录因子NMA正常熔点琼脂糖PBS磷酸盐缓冲液PM毗哆胺SCGE单细胞凝胶电泳Tris三经甲基氨基甲烷TritonX-100曲酮一100VB6维生素B6V

3、r冲水大4卜Wt学tft论文提要糖基化终产物(AGEs)是由蛋白质、脂类或核酸的游离氨基端与还原糖经过一系列非酶促反应形成的结构复杂的不可逆复合物。持续高血糖状态下蛋白质非酶糖基化反应(NEG)是糖尿病慢性并发症(DCC)发生发展中的重要机制。因此，如何抑制蛋白质NEG成为近年来国内外研究的热点。本研究围绕一种新的AGEs形成抑制剂一毗哆胺(PM)对蛋白质NEG干预作用展开.结果证明:(1)蛋白质NEG与葡萄糖浓度、孵育时间呈正相关;(2)PM可抑带嗤白质早期和晚期糖基化产物的形成;(3)AGEs引起离体脾淋巴细胞DNA损伤，并存在一定的剂量一反应关系:同时PM可修复AGEs诱导的离体脾淋巴

4、细胞的DNA损伤。上述研究结果为DCC防治赋予崭新的内容和良好的前景。关键词糖基化终产物毗哆胺糖基化血红蛋白单细胞凝胶电泳DNA损伤DNA修复吉林A学月盯d匕学位嘴仑文前言随着我国社会经济的持续发展，人民生活水平的迅速提高和人均寿命的延长，糖尿病(diabetesmellitus,DM)发病率呈明显上升趋势。大量证据表明，人体持续的高血糖状态会导致许多结构功能蛋白和核酸蛋白发生非酶糖基化反应(nonenzymaticglycation,NEW，由此形成糖基化终产物(advancedglycationend-products,AGEs)1!l。近年来研究证实，AGEs不仅参与了糖尿病慢性并发症

5、(diabeticchroniccomplication,DCC)的发生发展，而且与早老性痴呆(Alzheimerdisease,AD)、透析相关性淀粉样变(dialysis-relatedamyloidosis,DRA)、动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、终末期肾病(end-stagerenaldisease,ESRD)等密切相关121。人体内AGEs主要来自体内合成，少量自食物中摄入。因此，减少内源性AGEs的形成是降低体内AGEs水平的有效途径。严格的血糖控制可降低体内的水平;但不幸的是，DM病人体内的血糖水平往往难以长期控制在正常范围。因此，有必要研发新的药物，以

6、减少AGEs的形成，或拮抗AGEs的生物学效应。AGEs的形成过程还原糖的醛基或酮基与蛋白质、脂类或核酸的氨基端发生NEG，先生成不稳定的酮亚胺(Schif碱)，再经结构重排，转化成较稳定的酮胺类化合物(Amadori产物)，此为糖基化反应的早期阶段。此后，Amadori产物或Amadori产物经多步脱水和分子重排产生的多种高度反应性拨基化合物(dicarbonyls)，如3一脱氧葡萄糖酮醛(3-deoxyglucosone,3-DG),甲基乙二醛(methylglyoxal,MGO)等，进一步与游离氨基反应，最终形成不可逆的产物AGEs，此为糖基化反应的晚期阶段Dl。正常人体内该反官林大,

7、"t学位论文应进行得非常缓慢。通常只发生于某种转换率很低的蛋白质如基质蛋白，故各种基质结构中的AGES水平随年龄增长而增加[31传统认为典型的AGES呈棕色，具有产生荧光和发生交联(cross-links)的特性。然而近年证实，AGEs是一高度异质性的分子，已鉴定的结构成分包括戊糖素(pentosidine),N’一梭甲基赖氨酸(carboxymethyllysine,CML),pyrraline等。AGEs