马鞭草镇咳作用及药效物质基础研究

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1、河北医科大学博士学位论文马鞭草镇咳作用及药效物质基础研究姓名：袁志芳申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：史清文20090401中文摘要马鞭草镇咳作用及药效物质基础研究摘要马鞭草为马鞭草科(Verbenaceae)植物马鞭草Verbenaoj卵einalisL．的干燥地上部分，具有活血散瘀，截疟，解毒，利水消肿的功效。((HerbalDrugsandPhytopharmaceuticals))记载，在民间该药常常被用作利尿药、祛痰药和抗风湿药，在西班牙的Navarra地区，该药广泛用于抗炎。桂承会等于1985

2、年报道马鞭草水煎剂有一定镇咳作用，并证明马鞭草苷的镇咳作用与水煎剂基本一致。一般而言，中药发挥药效作用的物质基础多为一类或几类物质成分，马鞭草苷为马鞭草所含成分之一，与其同类的其他成分也有很多，是否发挥镇咳作用的为包括马鞭草苷在内的糖苷类物质呢?本文通过研究马鞭草提取液及分取液的镇咳活性，寻找其药效物质基础，在此基础上，分离确定马鞭草有效部位的化学成分，并对主要活性物质的含量、在动物体内的吸收、分布等情况进行探讨，为马鞭草的开发利用奠定基础。第一部分马鞭草镇咳作用的研究目的：研究马鞭草镇咳作用及有效部位，明确马

3、鞭草镇咳作用的药效物质基础。方法：观察马鞭草总提物及分取部位对小鼠因氨水所致咳嗽以及对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响；利用豚鼠因枸橼酸所致咳嗽试验对不同剂量的马鞭草提取物的镇咳和咳嗽潜伏期进行考察；利用小鼠呼吸道酚红排痰量试验研究马鞭草提取物的祛痰作用：探讨马鞭草提取物对磷酸组胺、氯化乙酰胆碱、氯化钾所致豚鼠离体气管痉挛的影响，分析其作用机制。结果：与对照组比较，马鞭草水提物、马鞭草醇提物、乙酸乙酯分取液、正丁醇分取液能明显减少小鼠咳嗽次数，显示出一定的镇咳效果，显著延长浓氨水诱发小鼠咳嗽潜伏期；与对照组比较，马鞭草

4、水提物、马鞭草醇提物、石油醚分取液、氯仿分取液、乙酸乙酯分取液、正丁醇分取液能明显抑制小鼠耳朵的肿胀度，显示出一定的抗炎效果；与对照组相比，马鞭草提取物小、中、大剂量明显减少豚鼠咳嗽次数，显示出一定的镇咳效果并能显著延长枸橼酸诱发豚鼠咳嗽潜伏期；与对照组相比，马鞭草醇中文摘要提物能明显增加酚红气道排泄量，马鞭草醇提物显示出一定的祛痰作用；不同剂量的马鞭草醇提物对磷酸组胺引起的离体气管平滑肌痉挛均有一定程度的抑制作用，而对氯化乙酰胆碱和氯化钾引发气管平滑肌痉挛没有作用。结论：药效学研究结果表明，马鞭草能够抑制浓氨

5、水所致小鼠咳嗽、枸橼酸所致豚鼠的咳嗽反应，并有明显的祛痰、对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的作用，能够显著地对抗磷酸组胺所致的豚鼠离体气管平滑肌痉挛。马鞭草的正丁醇部位和乙酸乙酯部位为发挥药效作用的主要物质基础。第二部分马鞭草镇咳有效部位化学成分的研究目的：本研究以马鞭草正丁醇和乙酸乙酯部分为研究对象，利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等分离纯化技术对其进行分离研究，寻找含有的化学成分，并应用MS、1H．NMR、13C．NMR现代化手段完成单体化合物分子的结构鉴定，为进一步开发利

6、用提供依据。方法：干燥的马鞭草(10埏)适当粉碎后，用95％乙醇冷浸二次，浸出液加热，加入活性炭趁热抽滤，合并滤液减压浓缩至粘膏状(520g)，将其悬浮于饱和NaCl水溶液中，分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，继而得到石油醚部位(11g)、氯仿部位(39g)、乙酸乙酯部位(52g)和正丁醇部位(118g)。本研究先后对乙酸乙酯部位和正丁醇部位采用硅胶柱色谱进行初步分离，经薄层色谱检识后，进一步用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱反复分离纯化得到单体化合物。运用MS、1H．NMR、

7、13C．NMR波谱学方法进行结构鉴定。结果：通过系统提取分离马鞭草，从中得到12个单体化合物，包括6个黄酮化合物，4个环烯醚萜苷类化合物，1个苯丙素糖苷，1个甾醇。结论：本文对马鞭草的化学成分进行了研究，所选用的提取方法及提取溶剂适当，采用了硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶色谱、制备薄层色谱、制备液相色谱等分离手段，共分离得至lJl2个化合物，并且运用多种现代波谱手段及其相关知识进行了结构鉴定，包括6个黄酮化合物，4个环烯醚萜苷类化合物，1个苯丙素糖苷，1个甾醇：山奈素，芹菜素，异鼠李素，4‘-羟基汉黄芩素，槲皮苷，木犀

8、草素，马鞭草苷，戟叶马鞭草苷，桃叶珊瑚苷，龙胆苦苷，毛蕊花糖苷，p．谷甾醇。中文摘要第三部分马鞭草主要糖苷含量测定的研究目的：建立HPLC／VWD法同时测定马鞭草中马鞭草苷和戟叶马鞭草苷以及利用HPLC／MS／MS法同时测定马鞭草中桃叶珊瑚苷、马鞭草苷、戟叶马鞭草苷、龙胆苦苷、毛蕊花糖苷的含量的方法，以控制该药材的质县夏。方法：取马鞭草药材粉末约O．5g，精密称定，加入80％甲醇20m