资源描述：
《gbt12392-1990 蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法(荧光法和2,4-二硝基苯肼法)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法（荧光法和2,4-二硝基苯肼法）GB/T12392-90Methodfordeterminationoftotalascorbicacidinfruits,vegetablesandderivedproducts-Fluorometricmethodandcolorimetricmethod━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了用荧光法和2,4-二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸。本标准适用于蔬菜、水果及其制品中
2、总抗坏血酸的测定。第—篇荧光法本标准参照采用国际标准ISO6557/1—1986《蔬菜、水果及其制品中抗坏血酸的测定方法》。2原理样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后,与邻苯二胺(OPDA)反应生成有荧光的喹喔啉(quinoxaline),其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比,以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应,以此排除样品中荧光杂质产生的干扰,最小检出限0.022μg/mL。3试剂本实验用水均为蒸馏水。3.1偏磷酸-乙酸液:称取15g偏磷酸,加入40mL冰
3、乙酸及250mL水,加温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至500mL。于4℃冰箱可保存7～l0d。3.20.l5mol/L硫酸:取10mL硫酸,小心加入水中,再加水稀释至1200mL。3.3偏磷酸-乙酸-硫酸液:以0.15mol/L硫酸液为稀释液,其余同3.1配制。3.450％乙酸钠溶液:称取500g乙酸钠(CH3COONa·3H2O),加水至1OOOmL。3.5硼酸-乙酸钠溶液:称取3g硼酸,溶于l00mL乙酸钠溶液(3.4)中。临用前配制。3.6邻苯二胺溶液:称取20mg邻苯二胺,于临用前用水稀释至100mL。3.7抗坏血酸标准溶液(
4、1mg/mL)(临用前配制)：准确称取50mg抗坏血酸,用溶液(3.1)溶于50mL容量瓶中,并稀释至刻度。3.8抗坏血酸标准使用液(l00μg/mL)：取10mL抗坏血酸标准液,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL。定容前试pH值,如其pH>2.2时,则应用溶液(3.3)稀释。3.90.04%百里酚蓝指示剂溶液:称取0.1百里酚蓝,加0.02mol/L氢氧化钠溶液,在玻璃研钵中研磨至溶解,氢氧化钠的用量约为10.75mL,磨溶后用水稀释至250mL。变色范围：pH值等于1.2红色pH值等于2.8黄色pH值大于4蓝色3.10活性炭的活化：加
5、200g炭粉于1L1+9盐酸中,加热回流1～2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110～120℃烘箱中干燥,备用。4仪器和设备4.1实验室常用设备。4.2荧光分光光度计或具有350nm及430nm波长的荧光计。4.3捣碎机。5操作方法5.1样品液的制备：称取100g鲜样,加100g偏磷酸-乙酸溶液(3.1),倒入捣碎机内打成匀浆,用百里酚蓝指示剂调试匀浆酸碱度。如呈红色,即可用偏磷酸-乙酸溶液稀释,若呈黄色或蓝色,则用偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释,使其pH为1.2。匀浆的取量需根据样品中抗坏血酸的含量而定。当样品液含量在40～100
6、μg/mL之间,一般取ZOg匀浆,用偏磷酸-乙酸溶液稀释至100mL,过滤,滤液备用。5.2测定步骤5.2.1氧化处理：分别取样品滤液(5.1)及标准使用液(3.8)各100mL于200mL带盖三角瓶中,加2g活性炭,用力振摇1min,过滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即样品氧化液和标准氧化液,待测定。5.2.2各取10mL标准氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“样准”及“样准空白”。5.2.3各取10mL样品氧化液于2个100mL容量瓶中,分别标明“样品”及“样品空白”。5.2.4于“标准空白”及“样品空白”溶液中各
7、加5mL硼酸-乙酸钠溶液,混合摇动15min,用水稀释至100mL,在4℃冰箱中放置2～3h,取出备用。5.2.5于“样品”及“标准”溶液中各加入5mL50%乙酸钠液,用水稀释至100mL,备用。5.3标准曲线的制备取上述“标准”溶液(5.2)(抗坏血酸含量10μg/mL)0.5、1.0、1.5和2.OmL标准系列,取双份分别置于10mL带盖试管中,再用水补充至2.0mL。荧光反应按5.4。5.4荧光反应取(5.2.4)中“标准空白”溶液,“样品空白”溶液及(5.2.5)中“样品”溶液各2mL,分别置于10mL带盖试管中。在暗室迅速向各管
8、中加入5mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反应35min,于激发光波长338nm、发射光波长420nm处测定荧光强度。标准系列荧光强度分别减去标准空白荧光强度为纵坐标,对应的抗坏血酸含量为横
