反义Survivin寡核苷酸逆转人卵巢癌细胞对顺铂耐药的实验研究

《反义Survivin寡核苷酸逆转人卵巢癌细胞对顺铂耐药的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、反义Survivin寡核普酸逆转人卵巢癌细胞对顺铂耐药的研究(中文摘劝导师:衫芝兰教授研究生:钱晓苦目的:本研究旨在探讨Survivin基因在卵巢癌顺铂耐药中的作用、机制以及与其他细胞凋亡调控基因的关系，探索反义Survivin寡核昔酸对顺铂化疗的增敏作用及其机理，探讨Survivin基因作为肿瘤基因治疗一个新的靶点的可行性。方法:1，采用反义Survivin寡核普酸转染COCi/DDP细胞以及梯度浓度顺铂分别作用于COC1细胞和COC1/DDP细胞;2.采用免疫荧光标记法、Westernblot和荧光定量RT-

2、PCR检测梯度顺铂作用后两种细胞株中SurvivinmRNA及蛋白表达的变化以及COC1/DDP转染前后SurvivinmRNA及蛋白表达的变化;3.流式细胞仪检测梯度顺铂作用后两种细胞株以及转染前后COC1/DDP细胞的凋亡及细胞周期的变化;4.三磷酸腺昔生物发光法检测梯度顺铂作用后两种细胞株的抑制率以及转染后COC1/DDP细胞协同顺铂作用后的抑制率。5.酶活性试剂及Westernblot检测不同浓度顺铂作用于COC1.COCl/DDP细胞及反义Survivin寡核营酸作用耐药细胞株COCl/DDP后casp

3、ase-3的表达和活性的变化6.采用免疫荧光标记法、Westernblot和RT-PCR检测COC1细胞和COCI/DDP细胞中P53,bcl-2表达的差异以及COC1/DDP转染后表达的变化.结果:1.人卵巢癌顺铂耐药细胞株COCI/DDP中Survivin的蛋白表达高于敏感细胞株COCl约2倍;同时随顺铂浓度增高表现不同特点，COC1细胞顺铂作用后升高迅速为15.43，是作用前3倍，而COCI/DDP细胞升高平缓，幅度较低。2，大剂量顺铂作用于COC1和COCI/DDP细胞后，Survivin的蛋白表达和mR

4、NA均下降直至消失。3.反义Survivin寡核昔酸作用COCI/DDP细胞后Survivin蛋白表达被抑制约50%,SurvivinmRNA被抑制约8.9倍;4.COC1细胞和COCI/DDP细胞在不同浓度顺铂作用24小时后，随着浓度的升高。调亡指数逐步升高;COCI细胞中S期和G2M期细胞所占的比例逐步下降，G.期细胞比例明显增多，COC1/DDP细胞中以G.期细胞减少的比例最高，G2M期细胞所占比例明显增高，S期细胞变化差异不大;COC1/DDP细胞转染survivin反义寡核昔酸后，24小时凋亡为59.7

5、%,S期细胞比例明显升高，由转染前的40%上升至转染后的50.8%,G2期由5.2%上升至9.6%，而G,期由54.8%下降至39.6%;5.梯度顺铂作用后，COC1和COCI/DDP细胞的抑制率逐步增高，以COCI细胞增高明显，转染协同0.1xPPC,0.5xPPC和I.Oxppc顺铂作用后COC1/DDP细胞株的抑制率分别为32.04%,41.6%和72.1，比COC1细胞在相同浓度顺铂作用后的抑制率27.2%.36.07%和48.09%明显要高;6.卵巢癌coca细胞和COC1/DDP细胞在顺铂作用后，随着

6、顺铂浓度的增加，caspase-3活性亦相应增加，呈剂量依赖关系，COC1细胞caspase-3活性较COCl/DDP细胞增加明显，以反义Survivin寡核昔酸封闭Survivin基因的表达可以导致COCl/DDP细胞Caspase-3的激活;7.COCI细胞中P53表达明显高于COC1/DDP细胞，而bcl-2的表达明显低于耐药亚株COCI/DDP细胞。反义Survivin寡核昔酸作用COCI/DDP细胞24小时后，P53的表达先轻微下降然后稍微增高，而bcl-2出现了明显下调。结论:Survivin基因在人

7、卵巢癌耐药亚株COC1/DDP细胞耐药机制中有着重要作用，通过抑制Caspase-3活性使细胞逃避凋亡产生耐药，同时涉及到影响其他基因调控细胞凋亡等更为复杂的机制。Survivin基因的反义寡核昔酸可以抑制Survivin基因的表达，增加COCIIDDP细胞的凋亡，起到顺铂增敏的作用。1关键词1卵巢癌;Survivin基因;反义治疗;顺铂;耐药AntisenseOligonucleotideTargetingSurvivinReversesCisplatin-Resistant-OvarianCancerCell

8、sTutor:介了Zhilanpeng:XiaoleiQianObjective:Thestudywasdesignedtoinvestigatethefunctionofthegenesurvivininthecisplatin-resistantandtherelationshipbetweengenesurvivinandothergenecorrelativeto