富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断

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1、富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断中华妇产科杂志1998年第2期第33卷论著作者：宋杰　李守柔　张爱臣　黄冰玉　何为公　庞传超单位：130041长春，白求恩医科大学第二临床学院妇产科关键词：性决定；产前诊断；聚合酶链反应　　【摘要】　目的　探讨对孕妇外周血中胎儿细胞进行非侵入性产前诊断的可行性。方法　对64例孕8～40周孕妇外周血进行密度梯度离心法，富集胎儿细胞，并经显微镜下观察计数各种细胞所占百分比。同时，对所富集细胞经提取DNA进行人Y染色体特异DNA扩增，判定胎儿性别并与新生儿性别进行对照。结果　64例孕妇外周血中，25例

2、观察到有核红细胞，占39.06%。64例孕妇分娩33例男性婴儿，其中28例扩增出Y特异带；另外31例分娩女性婴儿，除1例出现Y特异带，其余未见特异带。诊断的灵敏度为84.85%，特异度为96.77%，总符合率为90.63%。结论　密度梯度离心法可从孕妇血中富集胎儿细胞，且所获得细胞已基本满足体外扩增Y染色体基因所需要的模板量。　　DetectionandEnrichmentofFetalCellsinMaternalCirculationforPrenatalDiagnosisofFetalSex　　SongJie,LiShouro

3、u,ZhangAichen,etal.SecondClinicalHospital,NormanBethuneUniversityofMedicalScience,Changchun130041　　【Abstract】　Objective　Tostudyfetalcellsfrommaternalperipheralbloodforprenataldiagnosisoffetalsex.Methods　Samplesofperipheralbloodin64womenof8～40gestationalweekswerecollect

4、edtoenrichthefetalnucleatedredbloodcellsbydensitygradientcentrifugation.DNAwasextractedfromeachsamplesofenrichedfetalcellforPCRamplificationofYchromosomespecificDNAtodeterminefetalsex.Results　Fetalnucleatedredcellswerefoundin25outof64maternalsamples(39.06%).Ychromosome

5、149bpwasfoundin28casesofthe33mothersgivenbirthtomalebabies.OneYspecificDNAsequencewasdetectedin31womenhadfemalebabies.Thesensitivitywas84.85%andspecificity96.77%.Theoverallagreementofthediagnosiswas90.63%.Conclusion　Densitygradientcentrifugationcanenrichfetalnucleatedr

6、edbloodcellsfrommaternalperipheralblood.FetalsexcanbedeterminedbyPCRamplificationofYchromosomespecificDNAwiththesefetalcells.　　【Keywords】　Sexdetermination　　Prenataldiagnosis　　Polymerasechainreaction　　胎儿细胞存在于孕妇血循环内已被许多学者证实［1～3］，但数量极少且在不同孕周及不同个体之间存在很大差异。胎儿细胞包括胎儿有核红细胞、胎儿淋

7、巴细胞、胎儿滋养细胞。如何对上述细胞加以富集、分离并进行胎儿基因诊断，是目前产前诊断研究的一个热点。国外学者大多利用各种胎儿细胞表面特异抗原的单克隆抗体，经流式细胞计数仪分离纯化胎儿细胞［4，5］，但价格昂贵，技术复杂，不适合临床一般实验条件下开展此项研究工作。为了探讨利用孕妇血中胎儿细胞进行产前诊断的可能性，建立无创伤性且准确可靠的产前诊断新途径，我们设计了密度梯度离心法富集孕妇血中胎儿细胞，并经显微镜下观察，证实了孕妇血中胎儿细胞的存在，用聚合酶链反应(PCR)扩增Y染色体特异DNA序列进行胎儿性别判定。现将结果报道如下。资料与

8、方法　　一、标本来源　　外周血采自孕龄为8～40周的妊娠妇女，共64例，均为第一次妊娠，无贫血等合并症。每次采血为10ml，放入盛有2ml0.1%肝素的无菌瓶中，并用磷酸盐缓冲液(PBS)行1∶1稀释后混合备用。　　二、方法　　1.密