细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术

《细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验二细菌培养基的配制、灭菌及接种、培养技术1第一部分细菌培养基的制备、灭菌目的要求实验材料实验程序2目的要求熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。掌握培养基和无菌水的制备方法。掌握高压蒸气灭菌技术。3实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻璃珠等。4实验程序玻璃器皿的洗涤和包装培养基的制备无菌稀释水的制备培养基和玻璃器材等的灭菌5实验程序1（玻璃器皿的洗涤和包装）清洗并烘干玻璃器皿：如培养皿、移液管、试管等。棉塞的制作包装培养皿和移液管等。6实验程序2（培养基的种类）据组成成分可分为:1.合成培

2、养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。从培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入15～30g/L左右的琼脂。3.半固体培养基：在液体培养基中加入3～5g/L左右的琼脂。7实验程序2（培养基的种类）常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。8实验程序2（培养基的配制方法和步骤）1.取一个300mL烧杯，装150mL蒸馏水。2.按配方逐一正确称取各种成分，依次加入水中溶解。注意：a.前一种成分溶解之后，才能加入下一种成分

3、b.可加热促进各成分溶解c.加热过程应不断搅拌，以免糊底烧焦，并适当补充因蒸发而损失的水量。培养基配方牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水pH数量0.75g1.5g0.75g3g150mL7.69实验程序2（培养基的配制方法和步骤）3.调pH值：用10％NaOH调pH至7.6，用精密pH试纸对照。4.分装：将培养基分装于5支试管，其余全部倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意不要污染棉塞和瓶口。5.包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。6.灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒温培养24h，确定无菌生长，方可使用。10实验程序2（培养基的分装和斜面培养基的制作）☆每支试管装的量为试管高度的1/4～1

4、/3.☆斜面长度为试管长度的1/3～1/2.11实验程序2（培养基的配制方法和步骤）12实验程序3（无菌稀释水的制备）取一个250mL的锥形瓶装90(或99)mL蒸馏水，放30颗玻璃珠(用于打破活性污泥、菌块或土壤颗粒)于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。另取5支18mm×180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。无菌稀释水为微生物分离实验中所需要的材料。13实验程序4（培养基和玻璃器材等的灭菌）加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器干热灭菌的操作方法a.将待灭菌的物品放入恒温箱，将温度调节至160℃并维持2h；b.把恒温箱的调节旋钮调回零处，待温度降

5、到50℃左右，才能将物品取出。14实验程序4（培养基和玻璃器材等的灭菌）湿热灭菌：高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法的操作步骤如下：1.灭菌锅内加入一定量的水。2.将待灭菌的物品放入锅内，并关严锅盖。注意：器物不能装得太满。3.接通电源，进行加热。4.排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待温度计指示温度为100℃时关闭排气阀；或当排出的蒸气相当猛烈且微带蓝色时关闭排气阀。15实验程序4（培养基和玻璃器材等的灭菌）5.当压力达1.05kg/cm2(灭菌器内的温度为121℃)即开始灭菌，使其维持15～30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物质时，应适当降低压力(0.56kg/cm2)，延

6、长时间。6.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内剩余水。7.待培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。1617实验程序4（培养基和玻璃器材的灭菌方法）间歇灭菌法：即常压灭菌，用于一些受高温而破坏的培养基的灭菌。操作方法：a.待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次在100℃煮沸30～60min，连续3d重复进行。b.在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37℃恒温条件下培养24h，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。c.第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保

7、无菌仍要放在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。18实验程序4（培养基和玻璃器材的灭菌方法）过滤除菌法：不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。19第二部分细菌纯种分离、培养和接种技术目的要求实验材料实验程序20目的要求掌握从环境中分离培养细菌的方法，从而获得若干种细菌纯培养技能。掌握几种接种技术。21实验材料无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管