实验六 人类染色体核型分析.ppt

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1、实验六人染色体核型分析掌握人类染色体核型分析的方法。了解人类染色体数目和结构特征。一、实验目的核型（Karyotype）是指一个细胞内有丝分裂中期所有染色体的表型，如：数目、大小和形态特征等。通常将显微摄影得到的照片进行剪贴，使整套染色体按照一定的顺序排列构成图像。以核型图(karyogram)的方式表示。有四种方法：二、实验原理（1）常规的形态分析。选用分裂旺盛细胞的有丝分裂中期染色体，以测定各染色体的长度或相对长度（％），着丝粒位置及两臂长的比例，鉴别随体及副缢痕的有无作为分析的依据。（2）带型分析。

2、显带技术是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色，使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。根据染色体的不同带型，可以更细致而可靠地识别染色体的特征。如Q带、G带、C带、R带、T带、N带等。Q带：70年代初，瑞典细胞化学家Caspersson首先应用荧光染料喹吖因氮芥（quinacrinemustard）对染色体标本染色，在荧光显微镜下每条染色体出现了宽窄和亮度不同的纹，即荧光带。这些区带是DNA中AT成分丰富的部分。Q-bandedmetaphasespreadfromaphenotypicallynorm

3、alhumanmalewithanadditionalchromosomethatisanisochromosomefortheshortarmof15.G带：将染色体标本用胰酶、尿素、去垢剂或某些盐溶预先处理，再用Giemsa染料染色，称为G带。富含AT区染色深。GBandKaryotypeofanormalmale.人类染色体的G带标准图谱C带：constitutiveheterochromatin（结构异染色质）带的简称，可使着丝粒区、端粒区的异染色质及其他染色体区段的异染色质部分呈深染，其他部分浅染

4、。染色前需经酸、碱、盐处理，酸处理可使DNA脱嘌呤；碱处理可使DNA变性；盐溶液可使DNA骨架断裂。由于异染色质包装非常紧密，基本不受酸碱盐的破坏，Giemsa染色深染。而常染色质区受到破坏，Giemsa染色浅染。R带：与G带明暗相反（ReverseG-bands）目前所用的R显带方法是RBG法(R-bandbyBrdUusingGiemsa)，即经BrdU处理后用Giemsa染色。意义：G带染色体的两末端都不显示深染，而在R带中则被染上深色，因此R带有利测定染色体长度和末端区域结构的变化。对揭示染色体末端

5、缺失、重复、易位和断裂点的异常等有很高的价值。东北梅花鹿染色体R带带型T带：专一显示染色体的端粒。N带：专一显示核仁组织区。用硝酸银染色，可显示染色体的随体及核仁形成区，呈黑色银染物，这种银染阳性的核仁形成区(nucleolusorganizingregion，NOR)称为Ag-NOR。（3）着色区段分析。染色体经低温、KCl和酶解，HCl或HCl与醋酸混合液体等处理后制片，能使染色体出现异固缩反应，使异染色质区段着色可见。在同源染色体之间着色区段基本相同，而在非同源染色体之间则有差别。因此用着色区段可以帮

6、助识别染色体。（4）定量细胞化学方法。根据细胞核、染色体组或每一个染色体的DNA含量以及其他化学特性去鉴别染色体。核型分析的意义：★染色体组型分析——染色体水平上的表型★可确定物种的特征，确定种属亲缘关系★分析生物物种的变异和进化过程★识别单条染色体、基因定位★临床应用（染色体疾病、产前诊断）Interphase碱性染色的物质mitosis凝聚成染色体染色质（Chromatin)染色体(Chromosome)染色体特征：核型分析时对细胞进行特殊处理，使较多细胞处于有丝分裂中期，或得有丝分裂中期的染色体随体：

7、位于染色体末端的球形染色体节段，通过次缢痕区与染色体主体部分相连。位于染色体末端的随体称为端随体，位于两个次缢痕中间的称中间随体。主缢痕（着丝粒）次缢痕中期染色体的特征：根据着丝粒的位置，染色体可分为四种：①中央着丝粒染色体（m）;②亚中着丝粒染色体（sm）;③亚端着丝粒染色体（st）;④端部着丝粒染色体（t）。中央着丝粒染色体m亚中着丝粒染色体sm亚端着丝粒染色体st对于任何一个染色体的基本形态学特征，有3个重要特征：（1）相对长度（relativelengh）：指单个染色体长度与所有单倍染色体的总长之比

8、。（2）臂指数（armindex），指长臂与短臂之比。按Levan（1964）划分标准，臂指数在1.0~1.7之间为中部着丝粒染色体，1.7~3.0之间为亚中着丝粒染色体，3.0~7.0之间为亚端着丝粒染色体，＞7.0为端部着丝粒染色体。相对长度=每个染色体长度×100%单倍染色体长度（3）着丝粒指数（centromereindex），指短臂占该染色体长度的比率，决定着丝粒的相对位置。按Levan（1964）划分