红葱黄酮、红葱甲素提取与测定

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1、黄酮提取方法：1材料与方法1.1材料①红葱。②试剂：95%乙醇；甲醇CP；三氯化铝CP；盐酸CP；氨水CP；正丁醇CP；冰乙酸CP；乙醇乙酯CP；芦丁对照品（中国生物制品检定所）。③仪器设备：紫外线分光光度计；DZF-150小型真空恒温干燥箱；离心机；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。1.2方法1.2.1工艺流程洋葱中总黄酮提取工艺流程。新鲜红葱-----去皮------清洗-----加水打浆------浸提-----四层纱布过滤-----真空抽虑-----黄酮提取物-------大孔吸附树脂吸

2、附------解析-----旋转蒸发----冷冻干燥---总黄酮。（该方法为大量、高精度提取方法）1.2.2操作步骤新鲜红葱，切碎，烘干，取50g，置于大的烧杯中，加蒸馏水煮沸3h。冷却后进行粗滤，对滤渣用上述方法进行再浸取2次，将3次滤液合并，滤液用高速离心机分离15min，1500r/min。并进行加热浓缩（加热温度在85℃左右）。浓缩冷却后加入等体积95%乙醇，放入冰箱内2h。用高速离心机进行分离15min，1500r/min。过滤得滤液滤渣，弃去滤渣。对滤液进行蒸发浓缩（加热温度在85℃左右）。待乙醇

3、蒸发完后，将浓液置于真空干燥箱中干燥成疏松固体，粉碎得终产物。（实验室少量提取法）1.3总黄酮的含量测定1.3.1标准曲线的制备：1.3.1.1芦丁对照品溶液的制备：精密称取120℃干燥恒重的芦丁标准品10mg，加80%乙醇置水浴加热溶解，冷却，定容至25mL容量瓶中，即为0.4mg/mL的芦丁对照品溶液，摇匀，备用。1.3.1.2最大吸收波长的选择：精密吸取0.4mg的芦丁对照品溶液lmL置于25mL的容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.75mL，放置6min后，加10%硝酸铝0.75mL，放置6min，再加4%的

4、氢氧化钠10mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，以空白试剂作对照，用紫外分光光度计进行全波长扫描，确定最大吸收波长。1.3.1.3芦丁标准工作曲线的绘制：精密吸取标准品溶液0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.75mL，放置6min后，加10%硝酸铝0.75mL，放置6min，再加4%的氢氧化钠10mL，加水至刻度，摇匀，放置15min。以第一管为空白。，在最大吸收波长处测定吸光度值，以吸光度值为横坐标，芦丁对照品溶液浓度为纵坐标，绘制标准曲线

5、。1.3.2提取物含量的测定：精密称定提取物1.5g，置索氏提取器中，加95%乙醇回流至无色（6～8h），将提取液置于烧杯中，沸水浴加热浓缩至干，再用热水洗涤3次，将洗液移至分液漏斗中，并加无水正丁醇液萃取3~5次，10mL/次。合并萃取液于烧杯中，沸水浴蒸干，再加95%乙醇使其溶解，并移于50ml容量瓶中，再加95%乙醇至刻度，摇匀。精密量取10ml于50ml容量瓶中，加95%乙醇至刻度，摇匀，按标准曲线的制备操作测定吸光度。1.3.3红葱黄酮的定性检测：①紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光

6、下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。②浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏30s，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。③三氯化铝反应：取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。④乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。⑤盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓的盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。红葱甲素方

7、法1材料与试剂1.1材料：新鲜红葱(60℃以下烘干3～5h，粉碎，粒度≤1mm)1.2试剂：红葱甲素标准品；甲醇；四氯化碳；氯仿；石油醚；3，5-二硝基苯；甲酸；氢氧化钾；所用试剂都为分析纯。柱层析硅胶(100~200目)、(200~300目)、薄层层析硅胶板GF254(20×20cm)。Kedde’s试剂的配制：A：1%3，5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液B：10%氢氧化钾甲醇溶液按A:B＝3:1现用现配，喷雾使用。1.3仪器：三用紫外分析仪，HP1100高效液相色谱仪。2试验方法2.1红葱甲素高含量粗提物的制备

8、方法2.1.1浸提溶剂的选择(选择最优的浸提剂）取新鲜红葱15g加入圆底烧瓶中，分别用溶剂(50%甲醇、70%甲醇、甲醇、95%乙醇、水)浸泡回流提取(60ml×3，5h)，过滤，合并滤液，浓缩得到醇浸膏，加入等量的水，混合成悬浮液，再用氯仿30mL×3萃取，合并氯仿液，用无水硫酸钠干燥后浓缩，得氯仿浸膏A1~A5。氯仿浸膏直接用甲醇∶水＝80∶20的混合溶剂定容至10mL，用高效液相色谱分析含量。