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《Multiple isoforms of immune-related genes from hemocytes and eyestalk cDNA libraries翻译》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、通过三疣梭子蟹血细胞和眼柄cDNA文库对免疫相关基因的多个亚型进行研究关键词：、、、、摘要表达序列标签(est)分析已被证明是一种有效的方法不仅对基因的发现,但也对基因表达谱数据的性能。两个完整的浓缩cDNA文库是通过梭子蟹属血的细胞和眼柄构建的，并分别且随机测序用以收集基因组2息和识别基因参与免疫防御反应。其中，包括64非重复序列(6.00%的1066unigenes)在通过血细胞文库和35非重复序列(6.86%的510unigenes)在眼柄库标识在内的共99unigenes被确定为免疫基因。这些基因分为六类，抗菌肽,氧化还原蛋白质,黑化作用相关的蛋白质,伴侣蛋白,凝固蛋白和其他免疫因素。
2、在眼柄库中，免疫基因表的内容和类别眼表明眼柄可能在蟹免疫中扮演者一个未被人们认知的角色。包含多个蛋白质亚型的五种免疫基因已经被识别并各具特点,包括反垄断糖类因子(PtALF1-7)、crustin(PtCrustin1-3)、硫氧还蛋白(PtTrx1-2),夹域丝氨酸蛋白酶(PtcSP1-5)和kazal（卡扎尔）型蛋白酶抑制剂(PtKPI1-4)序列比对和进化分析显示反垄断糖类因子包含两个半胱氨酸残基,可能是由多个基因位点进行编码。PtCrustin1-3分享一致的半胱氨酸的主题,被认为是crustins1型PtTrx1拥有关键结构半胱氨酸残基Trx-1中的C73，而PtTrx2有Trx-2
3、的N-末端的线粒体易位信号。序列分析表明PtcSP1-5，包含一个夹域和一个部分SP催化三联域。PtKPI1-4呈现一个典型的Kazal域，包含6个保守的半胱氨酸残基。一些蛋白异构体有组织特异性，这可能会暗示他们有不同的起源，并执行不同的功能。除PtALF1-3和PtCrustin1，其他亚型还是在三疣梭子蟹这项研究中首次发现。特别是，PtTrx2首次在甲壳类动物中被发现。我们的研究将提供有用的基因组信息，有利于对蟹免疫的分子机制的了解。介绍cDNA文库构建设和表达序列标签(est)分析是有效的方法，用以收集基因信息并识别有用基因。他们起初被用于发现新的人类基因，但现在广泛用于研究重要水产养殖
4、动物（包括鱼类、虾和螃蟹）的基因组学。EST数据库在基因表达分析上拥有丰富的资源,可以为在特定组织内的主要转录提供一个信息概览。许多组织特异的基因和表达模式特征已经成功表达,这对理解基因功能,组织生理学和转录组学都是非常有用的。这种甲壳纲动物血细胞在宿主免疫反应中起着非常重要的作用，包括识别、吞噬作用,黑化作用,细胞毒性和细胞内信号交流。来自血细胞的EST数据库已开发了许多甲壳纲动物物种,其中各种各样的免疫相关的基因已经进行了表征免疫基因中,多个蛋白质亚型已被报道在同一个生物体的血细胞内共存。例如,至少五个不同的亚型的抗脂多糖因子已确定在中国对虾中存在。几个crustins亚型已经在凡纳滨对虾
5、和大西洋白对虾、青蟹属中证实。至少12和六kazal型蛋白酶抑制剂分别在小龙虾和斑节对虾中发现。这些蛋白亚型区分于长度和序列，并扮演者不同的生物活性。甲壳纲动物的眼柄是一个重要的神经内分泌器官复合体并有独特的能力来调节许多生理过程包括脱毛、生长和生殖[19、20]。EST的研究进行了几种眼柄甲壳纲动物物种包括对虾和囊对虾属。许多基因专门参与视觉和神经内分泌系统，如抑制蛋白类、甲壳纲动物高血糖的激素(CHH)、脱皮抑制激素和蝗抗利尿肽(MIH)和颜料分散激素(PDH)。然而,直到现在,很少知道眼柄还扮演免疫角色。活梭子蟹属在中国是一个重要的水产养殖物种。频繁爆发的疾病导致产量减少和经济损失。分子
6、机制蟹免疫力的研究可能在蟹农业有利于发展更好的水产养殖管理策略。然而,三疣梭子蟹基因序列信息在公共数据库是非常有限的。当今研究主要目的的是从眼柄和血细胞中构建一个完整的cDNA库,和并执行est序列分析,以便确定免疫基因尤其是那些在三疣梭子蟹中的的多种蛋白质亚型。材料与方法：1组织收集和RNA提取一个男性梭子蟹(305.36克)从中国青岛一个商业农场获得。这个眼柄从蟹中切割。从最后一个腿使用注射器提取血淋巴,并迅速添加到一个等体积的抗-混凝剂。血-淋巴样立即在800g离心,4c10分钟，收集血细胞。血细胞和眼柄中总RNA和Trizol试剂(表达载体)在一起被分别分隔开来，信使MRNA纯化与Ol
7、igotex工具包(试剂盒)放在一起。总RNA和信使RNA的完整性都是例行审查与1%琼脂糖凝胶电泳。2cDNA文库构建通过姬氏和眼柄cDNA图书馆是构建的创造者智能cDNA图书馆建设工具根据厂商的协议(Clontech)。合成了第一股cDNA使用MMLV逆转录酶与智能IV寡核苷酸底漆和CDSIII/30pcr底漆。双-滞留cDNA(dscDNA)合成了长途PCR(ldPCR)与50个PCR底漆和C
